【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：豬偽狂犬病毒gE 抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名稱：Swine Pseudorabies Virus gE Antibody Test Kit （ELISA）, gE Ab
【包裝規(guī)格】
96×2 測試/盒
【預期用途】
本試劑盒用于定性測定豬血清中偽狂犬病毒gE 蛋白的IgG 抗體。用于區(qū)別臨床野毒感染產(chǎn)生的抗體和
用gE 基因缺失疫苗免疫產(chǎn)生的抗體、感染豬的血清學診斷以及豬偽狂犬病毒病的流行病學調(diào)查。
【檢驗原理】
本試劑盒應用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）原理，由包被有高純度的gE 蛋白的微孔反應板、辣根
過氧化物酶標記的抗豬IgG 及其它試劑配套組成。其反應機理為包被抗原與樣本中的gE-IgG 結合，再與酶
標抗豬IgG 抗體形成“包被抗原+gE-IgG+酶標抗豬IgG 抗體”復合物，加入顯色劑，通過酶催化反應顯色。
顯色深淺與gE-IgG 的量成正比，當顯色超過設定的臨介值時結果判為陽性，表明豬有自然感染。
【主要組成成份】
1． gE 抗原包被板96T×2 塊包被有gE 蛋白抗原
2． 酶標記物（黃蓋） 22ml×1 瓶含辣根過氧化物酶標記的抗豬IgG 抗體
3． 樣本稀釋液（透明蓋） 25ml×1 瓶主要成份為0.01M PBS 緩沖液
4． 濃縮洗滌液（20×）（白蓋） 50ml×1 瓶PBST 緩沖液，用前用去離子水20 倍稀釋
5． gE-IgG 陰性對照血清（綠蓋） 1.5ml×1 瓶主要成份為gE-IgG 陰性血清
6． gE-IgG 陽性對照血清（紅蓋） 1.5ml×1 瓶主要成份為gE-IgG 陽性血清
7． 顯色劑A（紫蓋） 12ml×1 瓶主要成份為過氧化脲
8． 顯色劑B（黃蓋） 12ml×1 瓶主要成份為TMB
9． 終止液（藍蓋） 12ml×1 瓶主要成份為H2SO4
10． 蓋板膜6 張
11． 說明書1 份
不同批號的試劑組份不可混用。
【儲存條件及有效期】
于2℃～8℃避光保存，防止冷凍，有效期6 個月。
【適用儀器】
1．酶標儀，單波長450nm 測量或雙波長450/630nm 測量。
2．ELISA 用洗板機。
3．微量移液器。
4．水浴箱或恒溫箱。
5．微量振蕩器。
【樣本要求】
1．本試劑檢測的樣本為豬血清，樣本應無菌采集，2℃～8℃貯存不超過一周，長期應在-20℃以下保存。
2．避免使用嚴重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長菌的樣本。
3．樣本中含有常規(guī)用量的EDTA、枸櫞酸鈉或肝素鈉等抗凝劑不影響本實驗。
【檢驗方法】
1．加樣：根據(jù)樣本數(shù)量，取所需板條。單波長檢測時，需設空白對照1 孔（不加任何液體）；雙波長檢測
時，不設空白對照孔。設陰、陽性對照各2 孔，分別加入不稀釋的陰、陽性對照血清100μl 于相
應孔中。其余為樣本孔，每孔加100μl 樣本稀釋液，再分別加入樣本10μl（加入樣本后顏色會有
變化）。
2．溫育：加好樣后振蕩10 秒，充分混勻，置37℃溫育30 分鐘。
3．洗板：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液（濃縮洗滌液用去離子水以20 倍稀釋）注滿反應板孔，洗滌5 次，每
次停留1 分鐘，zui后一次洗后拍干。
4．加酶：每孔加酶標記物100μl，注意：空白孔不加酶標記物，也不加其他任何液體。
5．溫育：置37℃溫育30 分鐘。
6．洗板：同上洗滌。
7．顯色：每孔加顯色劑A、B 各50μl，振蕩混勻，37℃避光反應15分鐘。
8．終止：每孔加終止液50μl，振蕩10 秒，充分混勻。終止后5～30 分鐘內(nèi)讀數(shù)。
9．讀數(shù)：單波長檢測時，酶標儀檢測波長為450nm，以空白孔調(diào)零，讀取各孔吸光度值（A 值）；雙波長
檢測時，以450nm 為主波長、630nm 為參比波長，讀取各孔吸光度值（A 值）。注意：單波長檢
測時，若酶標儀讀數(shù)前沒有以空白孔調(diào)零，則所得的結果均應減去空白孔A 值再做計算和判定。
10．結果判定：
臨界值（CO.）= 0.15。
樣本A 值（S）/臨界值（CO.）≥1，判定為gE-IgG 陽性； S/CO.＜1，判定為gE-IgG 陰性。
陰性對照血清A 值應小于0.10，陽性對照血清A 值應大于0.70，否則試驗不成立，需重新試驗。注意：
單波長檢測時，若酶標儀讀數(shù)前沒有以空白孔調(diào)零，則陰陽性對照血清A 值均應減去空白孔A 值再做判定。
【參考值（參考范圍）】
未自然感染豬偽狂犬病毒的健康豬群為陰性，S/CO.＜1。
【檢驗結果的解釋】
1．嚴重溶血、血清中纖維蛋白分離不充分、含紅血球、有沉淀物、長菌的樣本可能導致假陽性。
2．陽性結果用于感染豬的血清學診斷以及流行病學調(diào)查時需結合其他方法和臨床資料進行。
【產(chǎn)品性能指標】
1．特異性以本品檢測30 份陰性參比血清不出假陽性。
2．敏感性以本品檢測30 份陽性參比血清不出現(xiàn)陰性。
3．精密性用精密性參比品測定，CV（%）不高于15%（n=10）。
4．穩(wěn)定性試劑盒在2℃～8℃放置6 個月或37℃放置3 天，檢定結果達到以上1-3 標準。
【注意事項】
1．本試劑盒僅用于體外診斷。
2．本試劑盒應按含有傳染性材料對待，操作時需戴手套穿工作衣。
3．實驗廢棄物應經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30 分鐘，或用5.0g/L 次氯酸鈉等消毒劑處理30 分鐘后廢棄。
4．微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開，未用完的微孔板須放回有干燥劑的
鋁箔袋并密封4℃保存。未用完的液體試劑應蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光
保存。
5．若20 倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結晶，屬正常現(xiàn)象，放置37℃至溶解后即可。
6．應用微量移液器加入樣本及試劑，并經(jīng)常校對其準確性。
7．加洗滌液時應做到滿而不溢，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。
8．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應立即用大量清水沖洗干凈。
【產(chǎn)品版本】gE V.1102