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*B1 ELISA試劑盒

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蘇州艾瑞德生物科技有限公司

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歡迎訪問(wèn)公司：http://www.ardbio.cn 蘇州艾瑞德生物科技有限公司是一家*的生物科研產(chǎn)品與合同供應(yīng)商，是國(guó)內(nèi)專注于食品安全檢測(cè)、動(dòng)物疫病檢測(cè)以及相關(guān)領(lǐng)域的高科技生產(chǎn)型企業(yè)。*以來(lái)，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定*，并與國(guó)內(nèi)的檢驗(yàn)檢疫管理部門及*科研院所等機(jī)構(gòu)密切合作，研究開(kāi)發(fā)*的檢測(cè)技術(shù)及產(chǎn)品?？擅鎸?duì)大型檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)和企業(yè)自有實(shí)驗(yàn)室提供全系列產(chǎn)品和有效的。

詳細(xì)介紹

一、原理
本試劑盒采用固相酶聯(lián)免疫吸附ELISA原理，通過(guò)*B1(AFB1)抗原和曲霉毒素B1(AFB1)抗體，待測(cè)抗原的競(jìng)爭(zhēng)免疫反應(yīng)，以及酶的催化顯色反應(yīng)來(lái)檢測(cè)AFB1，優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高，特異性好，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果易判讀，適用于食品、飼料及相關(guān)原料中AFB1的定量檢測(cè)。

二、試劑盒技術(shù)指標(biāo)
試劑盒靈敏度：0.1 ppb
回收率：谷物/飼料中AFB1回收率   95%±15%
變異系數(shù)：批內(nèi)變異系數(shù)<10%，批間變異系數(shù)<15%。

三、試劑盒組成
1．微量測(cè)試孔： 96T/8孔
2．標(biāo) 準(zhǔn) 液×6瓶：(1 mL/瓶) 0 ppb 0.05 ppb 0.15 ppb 0.45 ppb 1.35 ppb 4.05 ppb
3．抗體工作液                 7 mL
3．酶標(biāo)記物                  12 mL
4．底物緩沖液                 7 mL
5．底物液　                   7 mL
6．終止液                     7 mL
7．20倍濃縮洗滌液            50 mL   加蒸餾水后稀釋到1000 mL。

四、樣本前處理步驟
實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：配制60 %甲醇水溶液(v/v，60：40)和20 %甲醇水溶液(v/v，20：80)。
注意：請(qǐng)精確配制上述溶液，以免影響檢測(cè)的準(zhǔn)確性。
1 . 脂肪含量低的固體樣品(如大米、玉米、小麥和飼料等)
1、稱取5 g 粉碎樣品于100 mL帶塞三角瓶?jī)?nèi)，準(zhǔn)確加入25 mL 60%甲醇水溶液。
2、將加入了甲醇水溶液的樣品放入振蕩器內(nèi)(或用手強(qiáng)力振蕩)，充分振蕩3 min后，用濾紙過(guò)濾，收集濾液。
3、取濾液2 mL，加入6 mL 20 %甲醇水溶液，混勻，用whatman 1號(hào)濾紙過(guò)濾，此為樣品待檢液。
2．醬油、醋
1、稱取5 g樣品于25 mL小燒杯中，用10 mL蒸餾水將試樣轉(zhuǎn)移到125 mL分液漏斗中，加入25 mL三氯甲烷，加塞輕輕振搖3 min，靜置分層。
2、放出下層三氯甲烷層，取5 mL于20 mL蒸發(fā)皿中，65 ℃水浴通風(fēng)揮干。揮干冷卻后，準(zhǔn)確加入5 mL 60%甲醇水溶液，將蒸發(fā)皿中的凝結(jié)物充分溶解。
3、取溶解液2 mL，加入6 mL 20%甲醇水溶液，混勻，此為樣品待檢液。
3．食用油(如菜油、麻油、色拉油、花生油等)
1、稱5 g油樣于25 mL小燒杯中，用20 mL石油醚或正乙烷分次將試樣轉(zhuǎn)移至125 mL分液漏斗中，準(zhǔn)確加入25 mL 60%甲醇水溶液溶液，加塞輕輕振搖5 min，靜置分層，放出下層60%甲醇水提取液。
2、取提取液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混勻，此為樣品待檢液。
4．酒類
1、稱取5 g樣品于125 mL分液漏斗中，加入25 mL三氯甲烷，加塞輕輕振搖3 min，靜置分層。
2、放出下層三氯甲烷層，取5 mL于20 mL蒸發(fā)皿中，65 ℃水浴通風(fēng)揮干。揮干冷卻后，準(zhǔn)確加入5 mL 60%甲醇水溶液，將蒸發(fā)皿中的凝結(jié)物充分溶解。
3、取溶解液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混勻，此為樣品待檢液。
5．花生
1、樣品去殼粉碎，稱取5 g于100 mL具塞三角瓶中。加入25 mL 60%甲醇水溶液和20 mL正乙烷(或石油醚)，振搖10 min，用whatman 1號(hào)濾紙過(guò)濾。
2、收集濾液于125 mL分液漏斗中，靜置分層后放出下層60%甲醇水提取液。
3、取提取液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混勻，再用whatman 1號(hào)濾紙過(guò)濾，此為樣品待檢液。
6．月餅、桃酥、花生醬等
1、稱取5 g粉碎樣品于125 mL具塞三角瓶中，準(zhǔn)確加入25 mL 60%甲醇水溶液和20 mL正乙烷(或石油醚)加塞震蕩10 min，過(guò)濾，收集濾液于分液漏斗中，靜置分層。
2、待下層甲醇水溶液澄清后，放出甲醇水溶液于另一三角瓶中。吸取10 mL甲醇水提取液于125 mL分液漏斗中，加入20 mL三氯甲烷，加塞輕輕振搖3 min，靜置分層。放出下層三氯甲烷層，取10 mL于20 mL蒸發(fā)皿中，65 ℃水浴通風(fēng)揮干。揮干冷卻后，準(zhǔn)確加入5 mL 60%甲醇水溶液，將蒸發(fā)皿中的凝結(jié)物充分溶解。
3、取溶解液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混勻，此為樣品待檢液。
7．面粉、飼料濃縮料
1、稱取5 g樣品于125 mL具塞三角瓶中，準(zhǔn)確加入25 mL 60%甲醇水溶液加塞震蕩10 min，過(guò)濾，收集濾液。
2、吸取10 mL濾液于125 mL分液漏斗中，加入20 mL三氯甲烷，加塞振搖3 min，靜置分層。放出下層三氯甲烷層，取10 mL于20 mL蒸發(fā)皿中，65 ℃水浴通風(fēng)揮干。揮干冷卻后，準(zhǔn)確加入5 mL 60%甲醇水溶液，將蒸發(fā)皿中的凝結(jié)物充分溶解。
3、取溶解液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混勻，此為樣品待檢液。

注意：
1、某些樣品待檢液(如花生等)久置會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，為保證檢測(cè)的準(zhǔn)確性，樣品提取后請(qǐng)即時(shí)檢測(cè)。
2、若樣品待檢液不立即檢測(cè)，請(qǐng)將其存儲(chǔ)于棕色玻璃瓶?jī)?nèi)，2-8 ℃避光保存。
3、試劑盒在使用前，請(qǐng)將試劑盒內(nèi)所有試劑放到室內(nèi)溫度(20-25 ℃)進(jìn)行溫度平衡；試劑用完后立即將其放置回2-8 ℃冰箱內(nèi)保存。
4、在每個(gè)步驟操作時(shí)，速度要快，不要將板孔暴露在空氣中時(shí)間過(guò)久，避免酶標(biāo)板變干。未用完的酶標(biāo)板需密閉于自封帶內(nèi)，防止受潮且避光保存于2-8 ℃冰箱內(nèi)。
5、溫育時(shí)，需避光，建議將酶標(biāo)板置于濕盒內(nèi)(在有蓋容器內(nèi)放置一塊平整濕紗布)進(jìn)行溫育。

五、操作步驟：
1．將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出并將所需試劑從試劑盒取出，置室溫(20-25 ℃)平衡30 min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2．按需要取出微孔條及板架，將不用的微孔板重新密封，保存于2-8 ℃，不要冷凍。
3．加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50 µL /孔，然后加抗體工作液50 µL /孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板，室溫下環(huán)境反應(yīng)40 min。
4．洗板4-5次，每次浸泡30 s，拍干。
5．加入100 µL酶標(biāo)記物應(yīng)用液到微孔板中，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后，室溫下反應(yīng)20分鐘。
6．棄去孔中的液體，并在吸水紙上拍干，每孔注滿稀釋好的濃縮稀釋液，輕輕振蕩，棄去孔中液體，并在吸水紙上拍干，重復(fù)4次。
7．顯色：每孔加入底物緩沖液50 µL，再加底物液50 µL，輕輕振蕩混勻，室溫環(huán)境下避光顯色10 min。
8．測(cè)定：每孔加入終止液50 µL，輕輕振蕩勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450 nm處(在20 min內(nèi)讀完數(shù)據(jù))，測(cè)定吸光度值。

六、結(jié)果判定
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以*B1(AFB1)標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中*B1(AFB1)的實(shí)際濃度。

七、注意事項(xiàng)
1．室溫低于20 ℃或試劑及樣本沒(méi)有回到室溫(20-25 ℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2．洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
3．混合要均勻，洗板要*，否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
4．反應(yīng)終止液為2 M ，避免接觸皮膚。
5．將不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封; 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
6．不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒，不要使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。
7．顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之，0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。

八、儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期
儲(chǔ)藏條件：試劑盒于2-8 ℃ 保存，不要冷凍。
保質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為1年，生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。