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人腸病毒(Enterovirus)ELISA試劑盒

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所在地上海市

更新時間:2018-01-20 00:27:39瀏覽次數(shù):176次

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人腸病毒(Enterovirus)ELISA試劑盒

試驗所需自備物品:

1.  酶標(biāo)儀(450nm波長濾光片)

2.  高精度移液器,EP管及一次性吸頭:0.5-10μl, 2-20μl, 20-200μl, 200-1000μl

3.  37恒溫箱雙蒸水或去離子水

4.  吸水紙

檢測前準(zhǔn)備工作:

1. 請?zhí)崆?/span>20分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。

2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,屬于正?,F(xiàn)象,可用40水浴微加熱使結(jié)晶*溶解后再配制洗滌液。(加熱溫度不要超過50)使用時洗滌液應(yīng)為室溫。

3.  標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品&標(biāo)本稀釋液1.0ml至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中,靜置10分鐘,待其充分溶解后,輕輕混勻(濃度為5000 pg/ml)。然后根據(jù)需要進(jìn)行倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋)。建議配制成以下濃度: 2500、1250、625、312.5、156.278.1、39.05、0 pg/ml。樣品稀釋液直接作為空白孔 0 pg/ml。如配制2500pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5ml (不要少于0.5ml )5000pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的EP管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

4. *化抗體工作液:實驗前計算當(dāng)次實驗所需用量(100μl/孔計),實際配制時應(yīng)多配制100-200μl。使用前15分鐘,以*化抗體稀釋液稀釋濃縮*化抗體(1:100)成工作濃度。當(dāng)日使用。

5. 酶結(jié)合物工作液:實驗前計算當(dāng)次實驗所需用量(100μl/孔計),實際配制時應(yīng)多配制  100-200μl。使用前15分鐘,以*化抗體稀釋液稀釋濃縮*化抗體(1:100)成工作濃度。當(dāng)日使用。

人腸病毒(Enterovirus)ELISA試劑盒

洗滌方法:

1. 自動洗板機(jī):每孔加入洗滌液350μl,注入與吸出間隔60秒。洗板5次。

2. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,在潔凈的吸水紙上拍干,每孔加洗滌液350μl,浸泡1-2分鐘,吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。

實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫;試劑或樣品配制時,均需充分混勻,并盡量避免起泡。

1.加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?/span>100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣時將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。給酶標(biāo)板覆膜,37℃孵育2小時。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.棄去液體,甩干,每個孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜,37℃溫育1小時。

3.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,大約350μl /每孔,甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。

4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl,加上覆膜,37℃溫育1小時。

5.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。

6.每孔加底物溶液100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實際顯色情況酌情縮短或延長,但不可超過30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時,即可終止)

7.每孔加終止液50μl,終止反應(yīng),此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。

8.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD)。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀電源,預(yù)熱儀器,設(shè)置好檢測程序。

9.實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。
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