雜交瘤細(xì)胞抗AChE（小鼠B細(xì)胞x小鼠淋巴瘤）培養(yǎng)基

1. 液體培養(yǎng)基貯存于4 oC 冰箱，避免光照，實驗進(jìn)行前放在37 oC 水槽中溫?zé)帷?/p>

2. 液體培養(yǎng)基（加血清） 存放期為六個月，期間glutamine 可能會分解，若細(xì)胞生長不佳， 可以再添加適量glutamine。

3. 粉末培養(yǎng)基配制（以1 升為例）：

3.1. 細(xì)胞培養(yǎng)基通常須添加10 % 血清，因此粉末培養(yǎng)基之配制體積為900 ml，pH 為7.2 - 7.4。NaHCO3 為另外添加，若將NaHCO3 粉末直接加入液體培養(yǎng)基中會造成pH 之誤差，或局部過堿。因此粉末培養(yǎng)基及NaHCO3 粉末應(yīng)分別溶解后才混合，然后用CO2 氣體調(diào)整pH，而非用強(qiáng)酸（HCl）或強(qiáng)堿（NaOH），因為氯離子對細(xì)胞生長可能有影響，且貯存時培養(yǎng)基的pH 易發(fā)生改變。

3.2. 材料：

3.2.1. 純水（milli-Q 水或二次至三次蒸餾水，水品質(zhì)非常重要）

3.2.2. 粉末培養(yǎng)基

3.2.3. NaHCO3 （Sigma S-4019）

3.2.4. 電磁攪拌器

3.2.5. 無菌血清瓶

3.2.6. 0.1 或0.2 mm無菌過濾膜

3.2.7. pH meter

3.2.8. 真空幫浦

3.2.9. CO2 氣體

3.3. 步驟：

3.3.1. 取粉末培養(yǎng)基溶于700 ml milli-Q 水中，攪拌使其溶解。

3.3.2. 稱取適量之NaHCO3 粉末（數(shù)量依培養(yǎng)基種類而異，表一）溶于200ml milli-Q 水中，攪拌使其溶解，然后通入CO2 氣體至飽和，約3-5 分鐘。

3.3.3. 將溶解且含飽和CO2 之NaHCO3 溶液加入溶解之液體培養(yǎng)基中混合?；旌笕芤褐畃H 應(yīng)為7.2-7.4，除非pH 值偏差太大，否則不需用酸堿再調(diào)整之。若為太堿，可再通入CO2 氣體調(diào)整pH。培養(yǎng)基以真空幫浦通過過濾膜時， pH 會升高0.1-0.2。

3.3.4. 以0.1 或0.2 mm 無菌過濾膜過濾滅菌，同時分裝至無菌容器中，標(biāo)示培養(yǎng)基種類、日期、瓶號等，貯存于4 oC。（血清亦可加入培養(yǎng)基中一起過濾）

3.3.5. 配制之培養(yǎng)基配制須作生長試驗與污染測試。