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XIAP相關(guān)因子1凋亡抑制蛋白抗體相關(guān)信息
免疫組織化學(xué)的概念:
免疫組化是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素) 顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì)),對其進(jìn)行定位、定性及定量的研究,稱為免疫組織化學(xué)。
免疫組化實(shí)驗(yàn)所用的抗體有哪些?
免疫組化實(shí)驗(yàn)中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。單克隆抗體是一個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體,應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動(dòng)物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動(dòng)物后,從動(dòng)物血中所獲得的免疫血清,是多個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。
一、免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)的概述
*免疫細(xì)胞化學(xué)(immunocytochemistry, ICC)
-是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素) 顯色來確定細(xì)胞內(nèi)抗原的成分(主要是多肽和蛋白質(zhì)),對其進(jìn)行定位、定性及定量的研究,稱為~。
(一) 對抗原和抗體的要求
*具有特異性高和親和力強(qiáng)的抗體是實(shí)驗(yàn)成功的首要條件。
-對抗體的要求:純度高、比活性強(qiáng);
*高度特異性抗體的獲得,取決于抗原的純度。
-對抗原的要求:純度高,免疫原性強(qiáng),穩(wěn)定無變化。
(二) 抗原 (antigen, Ag)
*抗原的概念:凡是在機(jī)體內(nèi)引起體液免疫和(或)細(xì)胞免疫反應(yīng)的物質(zhì),稱為抗原??乖哂袃蓚€(gè)方面的特性:
-免疫原性:引起機(jī)體產(chǎn)生抗體和(或)致敏淋細(xì)胞的特性;
-免疫反應(yīng)性:抗原能與相應(yīng)的抗體及致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異的結(jié)合或反應(yīng)的特性。
*根據(jù)抗原是否顯示免疫原性分為:
-*抗原:分子量較大,一般在10kDa以上,并具有較復(fù)雜的化學(xué)組成。
*免疫原性zui強(qiáng)的是蛋白質(zhì)抗原,多糖次之;脂類和核酸必需和蛋白質(zhì)及多糖形成復(fù)合物才具有良好的免疫原性。
-半抗原:又稱為不*抗原,分子量較小。例如:某些短肽、多糖、類脂和藥物等。
*半抗原必需與載體結(jié)合,才能獲得免疫原性。
載 體
*通常是具有高度免疫原性的大分子物質(zhì),具有將免疫原性傳遞給耦聯(lián)的半抗原能力。
-常用的載體有鑰孔血藍(lán)蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)、牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)、卵白蛋白(Ovalbumin,OVA)等。
-用戊二醛或碳化二亞胺作為交聯(lián)劑通過功能基團(tuán)-NH2、-COOH等將半抗原結(jié)合到載體上。結(jié)合比例為5kDa結(jié)合5~25個(gè)分子的小肽。
免疫組化實(shí)驗(yàn)所用的組織和細(xì)胞標(biāo)本有哪些?
實(shí)驗(yàn)所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類,前者包括石蠟切片(病理大片和組織芯片)和冰凍切片,后者包括組織印片、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片。
其中石蠟切片是制作組織標(biāo)本zui常用、zui基本的方法,對于組織形態(tài)保存好,且能作連續(xù)切片,有利于各種染色對照觀察;還能長期存檔,供回顧性研究;石蠟切片制作過程對組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響,但可進(jìn)行抗原修復(fù),是免疫組化中的組織標(biāo)本制作方法。
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