免疫熒光技術(shù)（immunofluorescence，IF）是根據(jù)抗原-抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素制成熒光標(biāo)記物，再用這種熒光抗體（或抗原）作為分子探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。
常用的熒光素有異硫氰酸熒光素（FITC）和藻紅蛋白（PE），前者發(fā)黃綠色熒光，后者發(fā)紅色熒光。在細(xì)胞或組織中形成的抗原-抗體復(fù)合物上含有熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標(biāo)本，熒光素受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光（黃綠色或橘紅色），可以看見熒光所在的細(xì)胞或組織，從而確定抗原或抗體的性質(zhì)、定位以及利用定量技術(shù)測定含量。由于熒光抗體具有安全、靈敏的特點(diǎn)，因此已廣泛應(yīng)用在免疫熒光檢測領(lǐng)域。根據(jù)熒光素標(biāo)記的方式不同，可分為直標(biāo)熒光抗體和間標(biāo)熒光抗體。
近年來，隨著熒光素和熒光檢測技術(shù)的不斷進(jìn)步，熒光檢測的靈敏度已經(jīng)接近同位素檢測的水平，直接標(biāo)記的熒光抗體逐漸取代間接標(biāo)記抗體。用熒光抗體示蹤或檢查相應(yīng)抗原的方法稱熒光抗體法；用已知的熒光抗原標(biāo)記物示蹤或檢查相應(yīng)抗體的方法稱熒光抗原法。這兩種方法總稱免疫熒光技術(shù)，以熒光抗體法較為常用。用免疫熒光技術(shù)顯示和檢查細(xì)胞或組織內(nèi)抗原物質(zhì)或半抗原物質(zhì)等方法稱為免疫熒光細(xì)胞（或組織）化學(xué)技術(shù)。
（1）直接熒光法 將熒光素標(biāo)記在相應(yīng)的抗體上，直接與相應(yīng)抗原反應(yīng)。其優(yōu)點(diǎn)是方法簡便、特異性高，非特異性熒光染色少；缺點(diǎn)是敏感性偏低，而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體。此法常用于細(xì)菌、病毒等病原微生物的快速鑒定。
（2）間接熒光法 用一抗與標(biāo)本中抗原結(jié)合，再用熒光素標(biāo)記的二抗染色。該法優(yōu)點(diǎn)是敏感度比直接法高，制備一種熒光素標(biāo)記的二抗即可用于多種抗原的檢查，但非特異性反應(yīng)亦增加。染色程序分為兩步，首先用未知未標(biāo)記的抗體（待檢標(biāo)本）加到已知抗原標(biāo)本上，在濕盒中37℃保溫30min，使抗原抗體充分結(jié)合，然后洗滌，除去未結(jié)合的抗體；然后加上熒光標(biāo)記的抗球蛋白抗體或抗IgG、IgM抗體。如果*步發(fā)生了抗原-抗體反應(yīng)，標(biāo)記的抗球蛋白抗體就會和已結(jié)合抗原的抗體進(jìn)一步結(jié)合，從而可鑒定未知抗體。
由于的特異性、快速性和在細(xì)胞和分子水平定位的敏感性與準(zhǔn)確性，在動(dòng)物檢驗(yàn)檢疫方面得到了廣泛應(yīng)用。
