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上海金穗生物科技有限公司

副溶血性弧菌檢測的免疫學方法

時間:2012-7-18閱讀:1365
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免疫學方法特異性強、靈敏度高、易于觀察、應用廣泛。血清學反應是zui基本的免疫學反應,主要用于細菌分型。目前,通過血清學反應,V.p可分為13種O血清型、71種K血清型。正確的分型為流行病學調查和臨床用藥提供依據(jù)。但此反應只能大概區(qū)分不同地區(qū)和來源的菌株,而且由于抗原位點受環(huán)境等因素的影響易發(fā)生突變,出現(xiàn)新的血清型時,以現(xiàn)有的血清檢測就會漏檢。

 
    目前,應用zui廣泛的免疫學方法是酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbentassay,ELISA)。該方法從抗體的包被到酶聯(lián)顯色,都已經(jīng)具備了成熟的技術,易于制備試劑盒,操作簡單,特異性好,靈敏度高。   
 
    由于V.p臨床分離株大多為TDH’株,TRH(thermostable related hemolysin)陽性株只占10%一15%,少數(shù)為TDH和TRH雙陽性,環(huán)境分離株幾乎無TDH+,所以大多研究者主要選擇TDH、TRH為抗原,制備相應的抗體進行檢測。ELISA抗體的包被與固定是關鍵,影響檢測的靈敏度和特異性。Honda等設計了一種新的固定方法,即用HCl、聚乙烯(p01ythylenceirnine,PEl)、甲基乙烯基馬來酸酐聚合醚(malwie anhydride methylvinyl ether copolymer,MAMEC)等化學試劑處理尼龍膜,接著固定包被TDH和TRH的單克隆抗體,然后與V·p培養(yǎng)肉湯中TDH或TRH反應15min,洗滌后,與抗TDH、TRH的兔血清多克隆抗體37℃反應15min,再與堿性磷酸酶標記的抗兔抗體IgG反應,zui后底物顯色。結果顯示,經(jīng)過緊密相連的三次抗原抗體反應,特異性100%,靈敏度95.15%,并且通過肉眼觀察就能區(qū)分TDH株和TRH株。同時,該尼龍膜也可以直接用于檢測糞便標本,特異性達88.9%,靈敏度達92%,并能在1h內完成檢測。此固定方法減少非特異性吸附,增強抗體結合度,從而增強了特異性,提高了靈敏度。但是,這種方法涉及抗體包被、固定、抗體的標記、顯色等步驟,操作煩瑣,技術要求高,而且尼龍膜不能長期保存,不能進行大規(guī)模臨床檢測。同時,直接檢測時,抗原量可能不足,抗原位點也容易改變,導致出現(xiàn)新的血清型,如近年來出現(xiàn)新的03:K6血清型,zui終造成漏檢。

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