在作物的碳素營(yíng)養(yǎng)中，作為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要是指可溶性糖和淀粉。它們?cè)跔I(yíng)養(yǎng)中的作用主要有：合成纖維素組成細(xì)胞壁；轉(zhuǎn)化并組成其他有機(jī)物如核苷酸 、核酸等；分解產(chǎn)物是其他許多有機(jī)物合成的原料，如糖在呼吸過程中形成的有機(jī)酸，可作為 NH 3 的受體而轉(zhuǎn)化為氨基酸 ；糖類作為呼吸基質(zhì)，為作物的各種合成過程和各種生命活動(dòng)提供了所需的能量。由于碳水化合物具有這些重要的作用，所以是營(yíng)養(yǎng)中zui基本的物質(zhì)，也是需要量zui多的一類。

Ⅰ 蒽酮法測(cè)定可溶性糖

一、原理

糖在濃硫酸作用下，可經(jīng)脫水反應(yīng)生成糠醛或羥甲基糠醛，生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應(yīng)生成藍(lán)綠色糠醛衍生物，在一定范圍內(nèi)，顏色的深淺與糖的含量成正比，故可用于糖的定量測(cè)定。

該法的特點(diǎn)是幾乎可以測(cè)定所有的碳水化合物，不但可以測(cè)定戊糖與己糖含量，而且可以測(cè)所有寡糖類和多糖類，其中包括淀粉、纖維素等（因?yàn)榉磻?yīng)液中的濃硫酸可以把多糖水解成單糖而發(fā)生反應(yīng)），所以用蒽酮法測(cè)出的碳水化合物含量，實(shí)際上是溶液中全部可溶性碳水化合物總量。在沒有必要細(xì)致劃分各種碳水化合物的情況下，用蒽酮法可以一次測(cè)出總量，省去許多麻煩，因此，有特殊的應(yīng)用價(jià)值。但在測(cè)定水溶性碳水化合物時(shí)，則應(yīng)注意切勿將樣品的未溶解殘?jiān)尤敕磻?yīng)液中，不然會(huì)因?yàn)榧?xì)胞壁中的纖維素、半纖維素等與蒽酮試劑發(fā)生反應(yīng)而增加了測(cè)定誤差。此外，不同的糖類與蒽酮試劑的顯色深度不同，果糖顯色zui深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖較淺，五碳糖顯色更淺，故測(cè)定糖的混合物時(shí)，常因不同糖類的比例不同造成誤差，但測(cè)定單一糖類時(shí)，則可避免此種誤差。

糖類與蒽酮反應(yīng)生成的有色物質(zhì)在可見光區(qū)的吸收峰為 620 nm ，故在此波長(zhǎng)下進(jìn)行比色。

二、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器設(shè)備

（一）實(shí)驗(yàn)材料

任何植物鮮樣或干樣。

（二）試劑

1. 80 ％乙醇。

2. 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（ 100 μg/mL ）：準(zhǔn)確稱取 100 mg 分析純*，溶于蒸餾 水并定容至 100 mL ，使用時(shí)再稀釋 10 倍（ 100 μg/mL ）。

3 ．蒽酮試劑：稱取 1.0 g 蒽酮，溶于 80% 濃硫酸（將 98% 濃硫酸稀釋，把濃硫酸緩緩加入到蒸餾 水中） 1000 mL 中，冷卻至室溫，貯于具塞棕色瓶?jī)?nèi)，冰箱保存，可使用 2 ～ 3 周。

（三） 儀器設(shè)備

分光光度計(jì) ，分析天平 ，離心管 ，離心機(jī) ，恒溫水浴 ，試管 ，三角瓶，移液管 （ 5 、 1 、 0.5 mL ），剪刀，瓷盤，玻棒，水浴 鍋，電爐，漏斗 ，濾紙 。

三、實(shí)驗(yàn)步驟

1. 樣品中可溶性糖的提取 稱取剪碎混勻的新鮮樣品 0.5 ～ 1.0 g （或干樣粉末 5 ～ 100 mg ），放入大試管 中，加入 15 mL 蒸餾水，在沸水浴中煮沸 20 min ，取出冷卻，過濾入 100 mL 容量瓶 中，用蒸餾水沖洗殘?jiān)鼣?shù)次，定容至刻度。

2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作 取 6 支大試管，從 0 ～ 5 分別編號(hào)，按表 24-1 加入各試劑。

表 蒽酮法測(cè)可溶性糖制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的試劑量

將各管快速搖動(dòng)混勻后，在沸水浴中煮 10 min ，取出冷卻，在 620 nm 波長(zhǎng)下，用空白調(diào)零測(cè)定光密度，以光密度為縱坐標(biāo)，含葡萄糖量（ μg ）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3 ．樣品測(cè)定 取待測(cè)樣品提取液 1.0 mL 加蒽酮試劑 5 mL ，同以上操作顯色測(cè)定光密度。重復(fù) 3 次。

四、結(jié)果計(jì)算

式中： C ——從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得葡萄糖量， μg 。

V T ——樣品提取液總體積 , mL 。

V 1 ——顯色時(shí)取樣品液量， mL 。

W ——樣品重（ g ）。