一、目的和要求
1.了解革蘭氏染色法原理及其在細菌分類鑒定中的重要性。
2.掌握革蘭氏染色的基本步驟。
二、原理
G+、G-細菌的細胞壁成分和結(jié)構(gòu)不同。G+的CW主要有肽聚糖形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成,在染色過程中,當用95%乙醇處理時,由于脫水而引起網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中的孔徑變小,CW通透性降低,使結(jié)晶紫-碘復合物被保留在CW內(nèi)而不易脫色,因此呈藍紫色。G-的CW中肽聚糖含量低,脂類物質(zhì)含量高,當用乙醇處理時,脂類物質(zhì)溶解,CW的通透性增加,使結(jié)晶紫-碘復合物容易被乙醇抽提出來而脫色,然后又被染上了復染劑的顏色,因此呈現(xiàn)紅色。
三、 菌種:大腸桿菌、
染液:革蘭氏染液
四、操作


具體步驟
制片——固定——初染(結(jié)晶紫染液)1-2min——水洗——媒染(碘液)1min——水洗——脫色(95%乙醇至無色——水洗——復染(番紅或復紅染液)1-2min——水洗——干燥——鏡檢
革蘭氏染色的關(guān)鍵環(huán)節(jié)
涂片不宜過厚,以免脫色不*,造成假陽性。
乙醇脫色時間
菌齡:應選擇活躍生的幼培養(yǎng)物作革蘭氏染色。培養(yǎng)時間過長,或死亡及部分自溶,改變了細菌CW的通透性,造成陽性菌的假陰性反應。
火焰固定不宜過熱
媒染劑的作用
媒染劑的作用是增加染料和細胞之間的親和性或吸附力,即以某種方式幫助染料固定在細胞上,使之不易脫落。
五、實驗報告
簡述各菌株的染色結(jié)果,并分別繪圖示其形態(tài)特征。
六、預習
細菌的芽孢染色法