天然免疫是特異性免疫的基礎(chǔ),并參與和影響特異性免疫,因此檢測機(jī)體天然免疫功能的狀態(tài),是評價(jià)機(jī)體免疫功能的重要組成部分。
一、中性粒細(xì)胞吞噬功能檢測
中性粒細(xì)胞吞噬細(xì)菌的現(xiàn)象稱為小吞噬現(xiàn)象,可以通過體外實(shí)驗(yàn)觀察其吞噬細(xì)菌的情況并測定吞噬功能。
【材料】白色葡萄球菌18小時(shí)肉湯培養(yǎng)物、抗凝人血、小試管、玻片、吸管、毛細(xì)吸管、瑞氏染色液。
【方法】
1、用酒精棉球消毒耳垂后,取血4滴(約0.2ml),收集于肝素(50u/ml)抗凝管中,混勻。
2、加入白色葡萄球菌18小時(shí)肉湯培養(yǎng)物2滴(約0.1ml,12億菌/ml)。
3、充分混勻,置37℃孵育10分鐘后取出。
4、取—滴全血-白色葡萄球菌混合液置于潔凈的載玻片上,推成薄血片,空氣中自然干燥。
5、瑞氏染色:瑞氏染液數(shù)滴覆蓋血膜,染1分鐘,再加等量pH6.8 PBS與染液混合,染10~15分鐘,注意勿使染液干涸。用蒸餾水沖洗,沖洗時(shí)平持玻片,在一端加水,使染料“漂”走。空氣中自然干燥或?yàn)V紙印干。
6、油鏡觀察,可見中性粒細(xì)胞吞噬葡萄球菌。如染色正確,可見細(xì)胞核及被吞噬細(xì)菌染成紫色,而中性粒細(xì)胞的細(xì)胞漿則為淡紅色。
【結(jié)果】觀察100個(gè)中性粒細(xì)胞,分別記錄吞噬細(xì)菌的中性粒細(xì)胞數(shù)和每個(gè)中性粒細(xì)胞吞入的細(xì)菌數(shù)。計(jì)算公式為:
二、巨噬細(xì)胞吞噬功能檢測
巨噬細(xì)胞吞噬異物的現(xiàn)象又稱為大吞噬現(xiàn)象。此試驗(yàn)通過檢測巨噬細(xì)胞對雞紅細(xì)胞的吞噬作用,了解巨噬細(xì)胞的吞噬功能。
【材料】小白鼠、滅菌肉湯培養(yǎng)基、1%雞紅細(xì)胞懸液、Hanks液、肝素、瑞氏染液。
【方法】
1、試驗(yàn)前一天,于小白鼠腹腔內(nèi)注射滅菌肉湯培養(yǎng)基1ml。
2、試驗(yàn)當(dāng)天,小白鼠腹腔內(nèi)注入1%雞紅細(xì)胞懸液1ml,輕揉腹部,使雞紅細(xì)胞分散。
3、30分鐘后,腹腔內(nèi)注入Hanks液2ml,輕揉腹部,然后吸取腹腔液注入盛有1ml Hanks液(內(nèi)含肝素10單位)試管中,37℃靜置30分鐘,1500轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘。
4、取沉淀物作涂片,自然干燥,瑞氏染色,鏡檢。
【結(jié)果】
1、吞噬率(%):指每100個(gè)巨噬細(xì)胞中吞有雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)。
2、吞噬指數(shù):100個(gè)巨噬細(xì)胞吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)除以100,即得吞噬指數(shù),即每個(gè)巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的平均數(shù)。
計(jì)算公式同上。
【附錄】
1、瑞氏染液配制:
稱取瑞氏染料0.1克,研磨于60ml甲醇中,過濾,貯褐色瓶中備用。
2、雞紅細(xì)胞懸液的制備:
用注射器由雞心內(nèi)取血數(shù)毫升,加于含枸椽酸鈉溶液的試管中,搖勻,離心沉淀,沉淀的紅細(xì)胞用Hanks液洗滌三次,配成1%濃度即成。