實驗?zāi)康模簬缀醮嬖谟谒兄参镏校渲幸院坦阮惙N子的活性較強。水稻萌發(fā)時活性zui強。水稻萌發(fā)時淀粉活性的大小與種子萌發(fā)力有關(guān)。過氧化氫酶也普遍存在于植物的所有組織中，其活性與植物的代謝強度及抗寒、抗病能力有一定。本實驗通過對水稻萌發(fā)期活性測定以及對幼苗期過氧化氫酶活性的測定，學(xué)習(xí)和掌握和過氧化氫酶的測定方法，了解水稻生長與之代謝的關(guān)系。

Ⅰ 活性的測定
一、原理
能將淀粉水解成麥芽糖，由于麥芽糖能將3，5-二硝基水楊酸試劑還原成3-氨基-5-硝基水楊酸的橙紅色化合物，且在一定范圍內(nèi)還原糖的濃度與反應(yīng)液的顏色成正比，故利用比色法可求出麥芽糖的含量。以5分鐘內(nèi)每克樣品水解產(chǎn)生麥芽糖的毫克數(shù)表示酶活性的大小。
植物可分為α-和β-兩種，其中β-不耐熱，在溫度70℃以上易鈍化：而α-不耐酸，在pH3.6以下則發(fā)生鈍化。根據(jù)以上特性，可分別測定這兩種的活性。如測定α-和β-的活性，即為總活性。
二、實驗材料、儀器及試劑
1．儀器：
20ml具塞試管 移液管 100ml容量瓶 石英砂 研缽
721型分光光度計 離心機 恒溫水箱 離心管
2．試劑：
（1）1%淀粉溶液：稱1.0克可溶性淀粉，加入100ml蒸餾水煮沸。（臨用時配制）
（2）pH5.6檸檬酸緩沖液：A、稱取檸檬酸21.0克，溶解后定容至1000ml；B、稱取檸檬酸鈉29.4克，溶解后定容至1000ml；量取A液55ml與B液145ml混勻，即為pH5.6的緩沖液。
（3）0.4mol/L氫氧化鈉溶液。
（4）3,5-二硝基水楊酸試劑：取1.0克3,5-二硝基水楊酸，溶于20ml mol/L氫氧化鈉中，加入50ml蒸餾水，再加入30克酒石酸鉀鈉，待溶解后，用蒸餾水稀釋至100ml，蓋緊瓶蓋，勿使二氧化碳進入。
（5）麥芽糖標(biāo)準溶液：稱取0.1000克麥芽糖，溶于少量蒸餾水中，然后定容至100ml，取為1mg/ml麥芽糖標(biāo)準液。實驗材料：萌發(fā)水稻種子。
三、實驗方法
1．酶液的制備：稱取去根萌發(fā)水稻種子2克（含外殼），置研缽中，加1克石英沙研磨成勻漿。用8ml蒸餾水分次洗滌研缽，將勻漿轉(zhuǎn)入離心管中，攪拌均勻后放置15～20分鐘（間隔攪拌2～3次）。3500rpm離心10分鐘，將上清液轉(zhuǎn)入100ml容量瓶，用蒸餾水定容至刻度，得粗酶液。
2．α與β-的酶促反應(yīng)：
取4支10ml具塞刻度試管，編號，按下表加入各液：
水稻萌發(fā)及幼苗期和過氧化氫酶活性測定
將以上各管混勻后，置40℃水浴準確保溫5分鐘，取出后立即向3、4號試管中加入4ml 0.4mol/L NaOH終止酶活性。
3．麥芽糖的測定：
（1）標(biāo)準曲線制作：取20ml 刻度試管7 支，編號，分別加入1mg/ml 麥芽糖標(biāo)準液0，0.2，0.6，1.0，1.4，1.8，2.0ml，然后各管加蒸餾水，使體積均達2ml，再向各管加3，5-二硝基水楊酸試劑2ml，置沸水浴中煮沸5分鐘，取出后冷卻，用蒸餾水稀釋至20ml，搖勻后在520nm波長下用分光光度計比色，以光密度值為縱坐標(biāo)，麥芽糖含量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準曲線。
（2）樣品的測定：取以上酶作用后的反應(yīng)液及對照管中的溶液各2ml，分別放入20ml具塞刻度試管中，加入2ml3，5-二硝基水楊酸試劑，置沸水浴中準確煮沸5分鐘，取出冷卻，用蒸餾水稀釋至20ml，搖勻在520nm波長下用分光光度計比色，記錄OD值，從麥芽糖曲線中查出相應(yīng)麥芽糖含量，進行結(jié)果計算。
四、結(jié)果計算
水稻萌發(fā)及幼苗期和過氧化氫酶活性測定
A—為酶反應(yīng)管中麥芽糖含量，即3，4號管中麥芽糖毫克數(shù)的平均值。
A′—為對照管中麥芽糖含量，即1，2號管中麥芽糖毫克數(shù)的平均值。