首先說(shuō)說(shuō)柱子能不能反沖的問(wèn)題，色譜柱到底能不能反沖?如果色譜柱兩端的篩板孔徑相同反沖是不會(huì)有什么問(wèn)題的，從填料流失的角度來(lái)說(shuō)，粒徑為5um，而篩板孔徑為2um，這種情況下正沖反沖都不會(huì)造成填料的流失;此外，從柱子裝填的角度來(lái)說(shuō)，裝柱時(shí)是按照與柱身箭頭相反的方向裝填的，與反沖時(shí)的液體流路方向相同，裝柱時(shí)那么高的壓力(通常大于40MPa)下用頂替液沖刷都沒(méi)有問(wèn)題，難道區(qū)區(qū)1ml/min流速下的十幾個(gè)MPa會(huì)造成柱床松動(dòng)?更何況反沖時(shí)通常用的要么是90%水、要么是90%或純的有機(jī)相，這么低的壓力又能對(duì)柱床造成什么樣的損傷?還有，填料的C18長(zhǎng)鏈?zhǔn)擎I合在裸硅膠上的，碳鏈的自由舒展對(duì)分析是zui有利的，不是說(shuō)你朝一個(gè)方向使用碳鏈就像水草一樣朝一個(gè)方向倒，用甲醇或乙腈等沖洗之后它會(huì)回復(fù)自由舒展?fàn)顟B(tài)的，即使它們確實(shí)朝一個(gè)方向倒，那么反向沖洗讓它們恢復(fù)一下初始狀態(tài)豈不是更好?所以我認(rèn)為反向沖洗不會(huì)對(duì)柱床造成影響。

那哪些柱子不能反向沖洗呢?我認(rèn)為有兩種是不能反向沖洗的，一種是兩端篩板不一樣不宜進(jìn)行反沖操作，因?yàn)槿肟诙撕Y板孔徑大一些會(huì)比較能耐固體顆粒物質(zhì)的堵塞，至少被堵的時(shí)間會(huì)相對(duì)較長(zhǎng)，這種情況下一旦反沖就有可能造成填料的流失，導(dǎo)致柱效下降。另一種是有柱頭塌陷的色譜柱不宜反沖，因?yàn)橹^塌陷了在柱頭上留下空間，反沖會(huì)導(dǎo)致柱床移動(dòng)，填料松動(dòng)、重新分布，但這種柱子您認(rèn)為還能使用嗎?柱頭塌陷意味著柱頭前面造成比較大的死體積，峰形只怕是早就變樣了，您還能指望用這樣的柱子進(jìn)行分析?所以對(duì)這種柱子而言反不反沖已經(jīng)沒(méi)有任何意義了，因?yàn)樗呀?jīng)是根廢柱子。

再說(shuō)說(shuō)為什么要正向使用，這個(gè)跟裝柱的方向有關(guān)系，和上面說(shuō)的一樣，裝柱的時(shí)候是按照與柱身箭頭相反的方向裝填的，在底部的填料會(huì)比較緊一些(由于高壓下不銹鋼管會(huì)發(fā)生細(xì)微的形變，管徑增大，而裝柱完成后不銹鋼管恢復(fù)原狀，柱內(nèi)填料能支撐一定的壓力，使這段壓力無(wú)法排除會(huì)保留在色譜柱的底部，其結(jié)果是底部的填料會(huì)更緊密一些)，如果把新柱子的入口端篩板打開(kāi)您會(huì)發(fā)現(xiàn)填料會(huì)多出來(lái)約1mm左右，就是這個(gè)道理。既然我們知道打開(kāi)后會(huì)凸出來(lái)1mm，那么就不難理解正向使用的必要性了，因?yàn)橹^上的填料有所損失能得到及時(shí)的補(bǔ)充(填料的損失通常是從柱頭開(kāi)始的，主要是針對(duì)樣品中傷柱子的成份，而來(lái)自流動(dòng)相造成的損傷往往是整體性的，因?yàn)檫M(jìn)樣量是很少的，流動(dòng)相的用量卻很大)，不至于柱頭塌陷，造成死體積。

還說(shuō)一下反向沖洗的優(yōu)勢(shì)。兩個(gè)理由，一是固體顆粒物質(zhì)通常會(huì)累積在柱頭上，正向沖洗是無(wú)法洗下來(lái)的，而反向沖洗則多多少少能沖下來(lái)一些，延緩了柱壓升高的時(shí)間。二是強(qiáng)保留物質(zhì)在柱頭上的累積，正向沖洗需要沖洗整個(gè)柱床的距離，本身就是強(qiáng)保留的東西，要想把它沖下來(lái)得需要花多少時(shí)間?也許用純甲醇或乙腈沖洗1個(gè)小時(shí)也沖洗不下來(lái)，反而造成了對(duì)柱床的二次污染;而反沖則只需要沖洗柱頭上一點(diǎn)點(diǎn)的距離，也許1cm長(zhǎng)度都不到，相比正向沖洗該要容易得多。