士鋒生物染色體GTG標(biāo)本制備

時間：2014/8/27閱讀：699

一、原理
非顯帶染色體除可根據(jù)形態(tài)分辨部分染色體，其他多數(shù)染色體難以確認(rèn)，而顯帶技術(shù)則可使染色體縱向長度上出現(xiàn)不同帶紋，以辨認(rèn)全部染色體。GTG即G帶，Trypsin（），Giemsa的簡寫。Giemsa染料是噻嗪--曙紅染料，染色體的著色有賴于在原位形成噻嗪--曙紅（2∶1）的沉淀物。著色首先取決于二個噻嗪分子同DNA結(jié)合，在此基礎(chǔ)上再結(jié)合一個曙紅分子，其次取決于一個疏水環(huán)境，以利于染料沉淀而著色。通過的顯帶預(yù)處理可除去陰性G帶區(qū)的疏水蛋白，或使它們的結(jié)構(gòu)變成更疏水狀態(tài)。由此可知，在G顯帶中抽取的蛋白往往是疏水的，且主要來自陰性G帶區(qū)。
二、用品和試劑
0.25%（0.85％NaCl配制，pH為7.2—7.4），余同實驗一。
三、操作步驟
1．標(biāo)本老化：
按常規(guī)制備人外周血淋巴細(xì)胞染色體標(biāo)本（未染色）氣干后，經(jīng)78℃烘箱2—3小時。取出置37℃恒溫箱3天后預(yù)處理。
2．預(yù)處理：
將染色體標(biāo)本浸入溶液（已置4℃冰箱穩(wěn)1小時以上）中40—50秒，取出立即水洗去多余。
3．Giemsa染色：
1∶10 Giemsa染色液染色5—10分鐘，洗去多余染料，氣干。
4．鏡檢：油鏡下可見分散良好的染色體縱軸上呈現(xiàn)深淺不同帶紋，即為可讀標(biāo)本。
四、注意事項
1．常規(guī)制備的染色體標(biāo)本，要有較多分裂相，分散良好，染色體長度適中。
2．GTG帶的關(guān)鍵在于處理的時間。若染色體仍著色較深，帶紋不明，則預(yù)處理時間不足，應(yīng)延長預(yù)處理時間；若染色體變粗并顯出毛糙邊緣，甚至呈糊狀，則為預(yù)處理過度，應(yīng)適當(dāng)縮短處理時間。
3．Giemsa染色時間要適中，時間短，著色不夠，深淺帶反差小；時間過長，著色深，亦影響帶紋反差，不易識別。

好看日韩在线视频免费,日本不卡一区二区三区,三级a全过程在线观看,亚洲精品国产9999久久久久

士鋒生物染色體GTG標(biāo)本制備

會員登錄

收藏該商鋪

提示