基因工程又稱遺傳工程、DNA 重組技術(shù)、分子克隆等。它是七十年代在分子生物學(xué)發(fā)展的基礎(chǔ)上形成的新學(xué)科。所謂基因工程,就是在分子水平上,用人工方法提?。ɑ蚝铣桑┠骋簧锏倪z傳物質(zhì),在體外切割,拼接和重新組合,然后通過載體把重組的DNA 分子引入受體細(xì)胞,使外源DNA 在受體細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制和表達(dá)。按人們的意愿定向創(chuàng)造生物新性狀,使之穩(wěn)定地遺傳給下一代。所以基因工程具有廣闊的應(yīng)用前景,即能為工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和工醫(yī)藥保健等開拓新途徑,又能為生物的細(xì)胞分化,生長發(fā)育,腫瘤發(fā)生等基礎(chǔ)研究提供有效的實驗手段。
近十余年來,基因工程的發(fā)展和應(yīng)用,迅速地推動了生物科學(xué)的發(fā)展,目前,基因工程技術(shù)已成為生物學(xué)領(lǐng)域許多實驗室的常用技術(shù),它的性和普及性使人們感到有必要在大學(xué)的教學(xué)課程中得到反映。所以,我系已為十幾屆本科生、研究生開設(shè)了基因工程技術(shù)實驗,選擇一些zui基本,zui常用的技術(shù),以使同學(xué)對基因工程有一個基本的了解,并能掌握一些基本技術(shù)。
但是基因工程的實際技術(shù)和實驗系統(tǒng)正在不斷的創(chuàng)新,新方法、新技術(shù)不斷推出,而且在有限的學(xué)時內(nèi),所能觸及的技術(shù)只是基因工程中極少的一部分,但從教學(xué)角度來看,是不可能面面俱到。我們只是希望通過本實驗,讓同學(xué)通過基因工程中zui基本的技術(shù)訓(xùn)練,為今后獨立工作打下基礎(chǔ)。
本實驗設(shè)計主要參考書為T·Maniatis 的《Molecuiar clong》第三版,彭秀玲等編著的《基因工程實驗技術(shù)》等。實驗中所選擇的方法和條件以適合于本實驗室設(shè)備為,具體參考應(yīng)用時,可作適當(dāng)更改。
本套實驗設(shè)計過程如下:
1. 染色體DNA的抽提
2. PCR 擴(kuò)增分離目的DNA 片段
3. 載體貭粒的抽提、純化及檢測
4. 載體及目的DNA 片段的限制性核酸內(nèi)切酶酶切與連接
5. 重組貭粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌
6.重組子的篩選、重組質(zhì)粒的抽提與鑒定