The study on enhancing expression of HBsAg with the cell fusion
He Wei，Jin Lijie，Li Yong，et al.
Changchun Institute of BioLogical Product，Changchun130062.
【Abstract】 Objective To enhance the expression of HBsAg.Methods We make
the CHO-C 28 Cell exˉpressing HBsAg and NS-1cell fuse together，and then determine the titre by RPHA.Results There are transient high expression
in the eleventh day after fusion，the titre of HBsAg is1:2048，that of control group is not more than1:256.Conclusion The fusion method can
enhance the expression of HBsAg，the result of this experiment provide eviˉdences for further research.
Key words CHO-C 28 cell NS-1cell cell fusion expression of HBsAg
CHO-C 28 細(xì)胞是一種能夠表達(dá)HBsAg的重組中國倉鼠卵巢細(xì)胞株，目前已投入大規(guī)模生產(chǎn)。提高HBsAg的表達(dá)水平，不僅可以提高疫苗產(chǎn)量，還會大幅度降低生產(chǎn)成本，一直是我們研究的方向。Cartwright ［1］ 報(bào)告，將骨髓瘤細(xì)胞SP2/0與能表達(dá)t-PA的CHO細(xì)胞融合，結(jié)果明顯提高了t-PA的表達(dá)量。據(jù)此，我們將CHO-C 28 細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞NS-1融合，結(jié)果出現(xiàn)了瞬時(shí)高表達(dá)，表明此方法可以提高HBsAg的表達(dá)量。
1 材料與方法
1.1 材料 CHO-C 28 細(xì)胞:本室保存種子庫提供。NS-1細(xì)胞，8-AG，HAT，PEG-4000:由博德公司李勇老師惠贈。DMEM培養(yǎng)基:由美國GIBCO公司生產(chǎn)。小牛血清:由杭州四季青工程材料研究所生產(chǎn)。RPHA試劑盒:蘭州生物制品研究所生產(chǎn)。
1.2 方法 ［2］
1.2.1 NS-1細(xì)胞的制備 為確保細(xì)胞對HAT培養(yǎng)基的敏感性，復(fù)蘇穩(wěn)定后，移種于含1%8-AG的DMEM培養(yǎng)基中，融合前1周換用無8-AG的培養(yǎng)液。
1.2.2 CHO-C 28 細(xì)胞的制備 復(fù)蘇穩(wěn)定的細(xì)胞，融合前用不含MTX的培養(yǎng)基傳代一次，備用。
1.2.3 細(xì)胞融合 采用聚乙二醇法。收集對數(shù)生的CHO-C 28 細(xì)胞與NS-1細(xì)胞（比例約為1:2），用單純DMEM混合后分為3份分別離心，800r/min離心8min，棄上清液，加入50%PEG-40000.8ml于37℃水浴中融合，加預(yù)熱的單純DMEM終止PEG作用，800r/min離心6min收集細(xì)胞。棄上清液，3份融合細(xì)胞分別加入不同的選擇培養(yǎng)基輕輕混懸，各移種于96孔培養(yǎng)板，100μl/每孔，37℃，5%CO 2 培養(yǎng)。1號板選擇培養(yǎng)基為:1%8-AG+HAT;2號板為:2%8-AG+HAT;3號板為:HAT。培養(yǎng)至第7天時(shí)全量換2%8 -AG+HAT液。
1.2.4 對照 融合前留取部分CHO-C 28 細(xì)胞，移種于另一96孔板，加*DMEM培養(yǎng)基，為對照孔。
1.2.5 檢測 采用反向血凝法檢測HBsAg表達(dá)量。
2 結(jié)果
2.1 形態(tài)學(xué)檢測 光學(xué)顯微鏡下可見:融合細(xì)胞培養(yǎng)至5～7d，3塊板未融合的NS-1細(xì)胞趨于死亡，7～9d，1號，2號板未融合的CHO-C 28 細(xì)胞趨于死亡，雜交瘤出現(xiàn)并緩慢分裂生長，形態(tài)呈上皮型，與CHO-C 28 細(xì)胞類似，體積稍大。3號板的CHO-C 28 母本細(xì)胞與融合細(xì)胞共同旺盛生長。未融合的對照細(xì)胞生長也很旺盛。
