普魯士藍染色試劑盒（核固紅法）

產(chǎn)品組成：

產(chǎn)品說明：

含鐵血黃素（Hemosiderin）是一種血紅蛋白源性色素，為金黃色或棕黃色顆粒，因其含鐵、金黃色，故稱為含鐵血黃素。當紅細胞被巨噬細胞吞噬后，在溶酶體酶的作用下，血紅蛋白被分解為不含鐵的橙色血質(zhì)和含鐵的含鐵血黃素。

Perls 普魯士藍反應(yīng)（Prussian blue reaction）又稱為含鐵血黃素染色，即經(jīng)過亞鐵氰化和稀酸處理后可以產(chǎn)生藍色，常見于吞噬細胞內(nèi)會間質(zhì)內(nèi)，主要顯示三價鐵鹽。Perls 普魯士藍是非常經(jīng)典的組織化學(xué)反應(yīng)，是顯示組織內(nèi)三價鐵的一種敏感、傳統(tǒng)優(yōu)良的方法，其染色原理為：亞鐵氰化溶液使三價鐵離子從蛋白質(zhì)中被分離出來，三價鐵與亞鐵氰化反應(yīng)，生成一種不溶解的藍色化合物即三價鐵的亞鐵普魯士藍，所以該反應(yīng)被稱為普魯士藍反應(yīng)。三價鐵的亞鐵

化物是一種很穩(wěn)定的化合物，在反應(yīng)后可用紅色染色劑進行復(fù)染，如核固紅、伊紅、中性紅等。

Perls stain 常用于顯示局部組織內(nèi)各種出血性病變，常見于吞噬細胞內(nèi)。在判斷含鐵血黃素沉積時，用 Perls  反應(yīng)可以得到證實，該染色方法可以很好的區(qū)分含鐵血黃素和其他色素。該染色液穩(wěn)定性好、可以保存、不易產(chǎn)生沉淀、應(yīng)用范圍廣、可以進行復(fù)染。該染色液的復(fù)染液采用核固紅，是經(jīng)典、常用的復(fù)染液。

自備材料：

1. 10%的中性福爾馬林

2. 系列乙醇

3. 蒸餾水

4. 4%的多聚甲醛

操作步驟（僅供參考）：

（一）石蠟切片染色

1、 組織固定于 10%中性福爾馬林，常規(guī)脫水包埋。

2、 切片厚度 4um，常規(guī)脫蠟至水。

3、 蒸餾水水洗 1min。

4、 切片入 Perls stain（見注意事項 4），浸染 15-30m

5、 蒸餾水充分沖洗 2-5min。

6、 入核固紅染色液，淡染細胞核 5-10min。

7、 自來水沖洗 1-5s。

8、 常規(guī)脫水透明，中性樹膠封固。

（二）冰凍切片染色

1、 無需脫蠟，直接迅速用蒸餾水沖洗 2～3min。

2、 染色、水洗、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟。

（三）細胞染色

1、 4%多聚甲醛固定 10～20min。

2、 自來水沖洗 2 次，每次 2min。

3、 蒸餾水沖洗 2 次，每次 2min。

4、 染色、水洗、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟。

染色結(jié)果：

陰性對照（可選）

取相同連續(xù)切片脫蠟至水。置于 5%的草酸中，孵育 2-6h 后，經(jīng) Perla stain，需要步驟同上。結(jié)果為陰性。

注意事項：

1、切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。

2、組織固定常采用 10%的中性福爾馬林，經(jīng)普通福爾馬林固定后，組織會有損傷。避免使用酸性固定劑，酪酸鹽處理也會妨礙鐵的保存。

3、整個操作過程中容器要干凈，避免使用金屬鐵制品，洗切片和容器時以蒸餾水為宜，因普通水內(nèi)含鐵質(zhì)。

4、Perls stain 染色時，應(yīng)根據(jù)樣本情況調(diào)整著色時間。

5、所有檢查切片都應(yīng)使用同一個陽性對照切片，選擇適合的對照非常重要。尸檢肺組織是一個很好的對照，包含相當數(shù)量的鐵陽性巨噬細胞(心衰細胞)。

6、系列乙醇應(yīng)經(jīng)常更換新液。

7、 冰凍切片和細胞的染色，根據(jù)具體情況摸索實驗條件。

8、 為了您的健康和安全，請穿實驗服并戴一次性手套操作。