離體魚心灌流

【目的】學(xué)習(xí)離體魚心灌流的方法，了解內(nèi)環(huán)境中各種因素的變化對心臟收縮的影響。

【原理】離體心臟放在生理溶液中可維持其生理特性一定時間，人為地改變生理溶液中的離子成分，或者加入某些藥物，能明顯地影響心臟的活動。

【器材】胡子鯰、羅非魚或其他魚類。蛙手術(shù)器械，斯氏（Straub）蛙心插管，蛙心夾，淡水魚心臟灌流液，小燒杯，滴管，絲線，刺激器，換能器（10g），二道生理紀(jì)錄儀，5%NaCl，2%CaCl2，1%KCl，10-4腎上腺素，10-5乙酰，肝素。

【方法與步驟】

⒈心臟插管 用探針在實(shí)驗(yàn)魚顱骨稍上劃斷脊髓，腹面朝上，把魚固定在蛙板上，暴露心臟。硬骨魚心臟結(jié)構(gòu)有很大變異。應(yīng)識別魚心臟各部分和心臟周圍大血管，如動脈干、動脈球、心室、心房、靜脈竇、總主靜脈等。

用剪刀小心剪去大血管周圍的系膜和。在心臟下方繞一線打一活結(jié)備用。在動脈干下穿兩條線，一條線在動脈干距動脈球半厘米的地方結(jié)扎，另一線置動脈球近心房處打一活結(jié)備用。提起動脈上的縛線，用眼科剪在動脈球前端沿向心方向剪一小斜口，把裝有心臟灌流液的斯氏蛙心插管（加入2~3滴肝素）由此口插入動脈球，再細(xì)心地將插管向心室方向插入，經(jīng)主動脈瓣入心室腔內(nèi)（不可以插的太深，以免心室壁堵住插管下口）。當(dāng)插管內(nèi)液面隨心搏上下波動時，說明插管已進(jìn)入心室腔，用滴管吸去插管中的液體，換上新鮮灌流液，然后將動脈球上備用的活結(jié)扎緊插管，并將線固定在插管的玻璃鉤上。

⒉摘出心臟 剪斷動脈干，小心提起插管和心臟，將心臟下方預(yù)先打了活結(jié)的線調(diào)至適當(dāng)位置，將總主靜脈進(jìn)行牢固的結(jié)扎（切勿損害靜脈竇），在結(jié)線處的下方剪斷，摘出心臟，用新鮮灌流液反復(fù)更換插管內(nèi)液體，至無紅色為止。保持灌流液面高度恒定（1.5~2cm），即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

⒊把蛙心插管固定在支架上 用蛙心夾夾住心尖，蛙心夾連線的另一端系于換能器的受力點(diǎn)上，換能器的輸出與生理紀(jì)錄儀的前端放大器接通。

⒋觀察項(xiàng)目

⑴用zui慢紙速（0.5mm/s），描記正常心搏曲線。曲線的疏密代表心跳頻率，可根據(jù)紙速來計(jì)數(shù)；曲線的幅度代表心室收縮強(qiáng)弱；曲線的基線代表心室舒張的程度。

⑵向插管中加入1~2滴5%NaCl溶液，同時做好給藥記號，描記心搏曲線，當(dāng)曲線出現(xiàn)明顯變化后，立即用滴管吸去插管中的灌流液，用新鮮灌流液換洗2~3次，使灌流液面保持原高度，待心搏恢復(fù)正常。

⑶加入1~2滴2%CaCl2溶液，觀察換液同前。

⑷加入1~2滴1%KCl溶液，觀察換液同前。

⑸加入1~2滴10-4腎上腺素溶液，觀察換液同前。

⑹加入1~2滴10-5乙酰溶液，觀察換液同前。

⑺若心臟活動正常，可進(jìn)一步觀察溫度對其的影響。將插管內(nèi)的灌流液全部換上33~35℃的灌流液，觀察心搏曲線的變化。然后換上溫室灌流液待心搏曲線恢復(fù)，再將插管內(nèi)的灌流液全部換上8~10℃的灌流液，觀察心搏曲線的變化。

注意事項(xiàng)：

⒈心室插管不可硬插，以免戳穿心壁；摘出心臟，勿傷靜脈竇。

⒉每個實(shí)驗(yàn)觀察項(xiàng)目前均應(yīng)有新鮮灌流液進(jìn)行的對照紀(jì)錄。

⒊各種藥液滴管要，不可混淆。每次加藥量不可過多，先加1~2滴，如效應(yīng)不明顯時可再補(bǔ)加。

⒋隨時滴加新鮮灌流液于心臟表面使其保持濕潤狀態(tài)。

⒌每次換液時，要求插管內(nèi)的液面保持相同的高度。