水蛭素（HR）基因蛋白聯(lián)免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱(chēng)：
通用名：水蛭素（HR）基因蛋白聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的：
本試劑盒用于測(cè)定相關(guān)液體樣本中水蛭素（HR）含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用間接法測(cè)定標(biāo)本中水蛭素（HR）基因蛋白水平。用純化的水蛭素（HR）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的水蛭素（HR）標(biāo)準(zhǔn)品和未知濃度的水蛭素（HR）待檢樣品，溫育后，加入標(biāo)記的抗IgG抗體，再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的水蛭素（HR）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中水蛭素（HR）濃度。
試劑盒組成
1 | 20倍濃縮洗滌液 | 50ml×1瓶 | 9 | 標(biāo)準(zhǔn)品S1（60ng/L） | 0.5ml×1瓶 |
2 | 鏈霉親和素-HRP | 6ml×1瓶 | 標(biāo)準(zhǔn)品S2（40ng/L） | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標(biāo)包被板 | 12孔×8條 | 標(biāo)準(zhǔn)品S3（20ng/L） | 0.5ml×1瓶 |
4 | 標(biāo)記的抗-IgG抗體 | 6ml×1瓶 | 標(biāo)準(zhǔn)品S4（10ng/L） | 0.5ml×1瓶 |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 標(biāo)準(zhǔn)品S5（5ng/L ） | 0.5ml×1瓶 |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 10 | 密封袋 | 1個(gè) |
7 | 終止液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 3張 |
8 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 12 | 說(shuō)明書(shū) | 1份 |
標(biāo)本要求
1．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
操作步驟
1. 根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣品孔。然后在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl，在樣本反應(yīng)孔中先加入待測(cè)樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl（樣品zui終稀釋度為5倍），蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
3. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
4. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)4次，拍干。
5. 加標(biāo)記的抗-IgG抗體：每孔加入標(biāo)記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘
6. 洗滌：操作同4。
7. 加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
8. 洗滌：操作同4。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值待入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，使用排槍加樣。
4． 如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請(qǐng)先將樣本稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù)（×5×n）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。顯色劑B請(qǐng)避光保存。
7．嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。
線形范圍：
2ng/L -70ng/L
規(guī)格：
96人份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個(gè)
