一．實驗目的

細菌轉(zhuǎn)化實驗
1．以pGLO質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌為例，學習轉(zhuǎn)化的基本原理及方法。

2．驗證DNA是遺傳物質(zhì)，加深對中心法則的理解。

二．實驗原理

轉(zhuǎn)化（transformation）是指一段同源或異源的DNA轉(zhuǎn)入受體細胞并得到表達的水平基因的轉(zhuǎn)移過程，是現(xiàn)代分子生物學研究和基因工程*的重要技術(shù)。目前常用的轉(zhuǎn)化方法有CaCl2法(化學轉(zhuǎn)化法)和電轉(zhuǎn)化法。本實驗是用pGLO細菌轉(zhuǎn)化試劑盒中提供的pGLO質(zhì)粒來轉(zhuǎn)化大腸桿菌，所用方法為CaCl2轉(zhuǎn)化法。 
pGLO質(zhì)粒： 細菌轉(zhuǎn)化實驗
pGLO質(zhì)粒上主要含有兩個基因，一個為編碼綠色熒光蛋白(GFP)的基因，一個為抗生素氨芐抗性基因。此外，該質(zhì)粒還整合有一個特殊的參與受體細胞中綠色熒光蛋白表達的基因調(diào)控體系，轉(zhuǎn)化細胞中的綠色熒光蛋白基因只有在培養(yǎng)基中存在阿拉伯糖時才能啟動表達。轉(zhuǎn)化子細胞將在不含阿拉伯糖的培養(yǎng)基上呈白色而在含阿拉伯糖的培養(yǎng)基上顯綠色熒光，這種熒光在長波紫外燈下即可觀察到。

三．實驗材料 
受體菌：E.coli K12 HB101
質(zhì)粒：pGLO plasmid
轉(zhuǎn)化液（CaCl2）
氨芐（amp）
阿拉伯糖（ara）
培養(yǎng)基：固體LB、液體LB
細菌轉(zhuǎn)化實驗接種環(huán)、移液器等

四．實驗步驟 

1. 準備平板： 每組：1塊LB平板，2塊LB/amp平板，1塊LB/amp/ara平板 

2. 準備感受態(tài)細胞：用250μl無菌水或轉(zhuǎn)化液懸浮試劑盒中提供的大腸桿菌菌粉，此即感受態(tài)細胞。 

3. 活化受體細胞：挑取1環(huán)E.coli K12 HB101菌液，于LB培養(yǎng)基上37℃活化16-24h。  

4. 轉(zhuǎn)化：

1）在兩只無菌離心管上分別標 
記+DNA, -DNA。 

2）在上述兩管中分別加入 
250μl轉(zhuǎn)化液。 

3) 迅速置于冰上。 

4）各挑取活化好的受體菌的一 
個單菌落，懸浮于兩管轉(zhuǎn)化液中。 

5）在標有+DNA的管中加入一 
環(huán)質(zhì)粒DNA，而標有-DNA的管中不加。 

6）將上述兩管于冰上放置10min。

7）在準備好的培養(yǎng)基底部如左圖。