蛋白質的定量分析是生物化學和其它生命學科zui常涉及的分析內(nèi)容，是臨床上診斷疾病及檢查康復情況的重要指標，也是許多生物制品，藥物、食品質量檢測的重要指標。在生化實驗中，對樣品中的蛋白質進行準確可靠的定量分析，則是經(jīng)常進行的一項非常重要的工作。
蛋白質是一種十分重要的生物大分子：它的種類很多，結構不均一，分子量又相差很大，功能各異，這樣就給建立一個理想而又通用的蛋白質定量分析的方法代來了許多具體的困難。目前測定蛋白質含量的方法有很多種，下面列出根據(jù)蛋白質不同性質建立的一些蛋白質測定方法：
物理性質：紫外分光光度法
化學性質：凱氏定氮法、雙縮脲法、Lowry法，BCA法，膠體金法
染色性質：考馬氏亮藍染色法、銀染法
其他性質：熒光法
蛋白質測定的方法很多，但每種方法都有其特點和局限性，因而需要在了解各種方法的基礎上根據(jù)不同情況選用恰當?shù)姆椒?，以滿足不同的要求。例如凱氏定氮法結果zui，但操作復雜，用于大批量樣品的測試則不太合格；雙縮脲法操作簡單，線性關系好，但靈敏度差，樣品需要量大，測量范圍窄，因此在科研上的應用受到限制；而酚試劑法彌補了它的缺點，因而在科研中被廣泛采用，但是它的干擾因素多；考馬氏亮蘭染色法因其靈敏而又簡便開始重新受到關注；BCA法又以其試劑穩(wěn)定，抗力較強，結果穩(wěn)定，靈敏度高而受到歡迎；膠體金法具有較高的靈敏度，可達到毫微克水平，用于微量蛋白的測定。

常用的測定蛋白質含量方法的比較
 

方 法

測定范圍

（μg/ml）

不同種類

蛋白的差異

zui大吸收

波長（nm）

特 點

凱氏定氮法

小

標準方法，準確，操作麻煩，費時，靈敏度低，適用于標準的測定

紫外分光光度法

100—1000

大

280
205

靈敏，快速，不消耗樣品，核酸類物質有影響

雙縮脲法

1000—10000

小

540

重復性、線性關系好，靈敏度低，測定范圍窄，樣品需要量大

Folin-酚試劑法

20—500

大

750

靈敏，費時較長，干擾物質多

考馬氏亮藍G-250

50—500

大

595

靈敏度高，穩(wěn)定，誤差較大，顏色會轉移

BCA

50—500

大

562

靈敏度高，穩(wěn)定，干擾因素少，費時較長 由于凱氏定氮法的操作作過于復雜，雙縮脲法的靈敏度又太低，下面介紹Folin—酚試劑法，考馬氏亮藍G—250染色法，紫外分光光度法、膠體金法等幾種zui常用使用的方法。

一、Folin－酚試劑法（又名Lowry）法
目前實驗室較多用用Folin-酚法測定蛋白質含量，此法的特點是靈敏度高，較雙縮脲高兩個數(shù)量級，較紫外法略高，操作稍微麻煩，反應約在15分鐘有zui大顯色，并zui少可穩(wěn)定幾個小時，其不足之處是干擾因素較多，有較多種類的物質都會影響測定結果的準確性。
【原 理】
蛋白質中含有酚基的，可與酚試劑中的磷鉬鎢酸作用產(chǎn)生蘭色化合物，顏色深淺與蛋白含量成正比。
【操 作】
1、標準曲線的制備：
按下表操作，在試管中分別加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1ml蛋白標準溶液，用生理鹽水補足到1ml。加入5ml的堿性酮試劑，混勻后室溫放置20分鐘后，再加入0.5ml酚試劑混勻。
編 號 1 2 3 4 5 6 蛋白標準（ml） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 0.9% NaCl（ml） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 堿性酮試劑（ml） 5 5 5 5 5 5 混勻后室溫（25℃）放置20分鐘 酚試劑（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 30分鐘后，以第1管為空白，在650nm波長比色，讀出吸光度，以各客的標準蛋白濃度為橫坐標，以其吸光度為縱坐標繪出標準曲線。
2、血清蛋白質測定。
稀釋血清（或其它蛋白樣品濃度）：準確吸取0.1ml血清，置于50ml容量瓶中，用生理鹽水釋釋至刻度（此為稀釋500倍，其它蛋白樣品酌情而定）。再取三只試管，分別標以1、2、3號，按下表操作：
編 號 測定管 標準管 空白管 稀釋標本（ml） 0.2 — — 稀釋標準液（ml） — 0.2 — 0.9%NaCl（ml） — — 0.2 堿性酮液（ml） 1.0 1.0 1.0 混勻后于室溫放置20分鐘 酚試劑（ml） 0.1 0.1 0.1

混勻各管，30分鐘后，在波長650nm比色，讀取吸光度。
【計 算】
1、以測定管讀數(shù)查找標準曲線求得血清蛋白含量。
2、無標準曲線時，可以與測定管同樣操作的標準管按下式計算蛋白含量：