(一)保留時(shí)間變化

1.柱溫變化 柱恒溫，必要時(shí)需配置恒溫箱;

2.等度與梯度間未能充分平衡 至少用10倍柱體積的流動(dòng)相平衡柱;

3.緩沖液容量不夠 用>25mmol/L的緩沖液;

4.柱污染 每天沖洗柱;

5.柱內(nèi)條件變化 穩(wěn)定進(jìn)樣條件，調(diào)節(jié)流動(dòng)相;

6.柱快達(dá)到壽命 采用保護(hù)柱。

(二)保留時(shí)間縮短

1.流速增加 檢查泵，重新設(shè)定流速;

2.樣品超載 降低樣品量;

3.鍵合相流失 流動(dòng)相PH值保持在3～7.5檢查柱的方向;

4.流動(dòng)相組成變化 防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀;

5.溫度增加 柱恒溫。

(三)保留時(shí)間延長(zhǎng)

1.流速下降 管路泄漏，更換泵密封圈，排除泵內(nèi)氣泡;

2.硅膠柱上活性點(diǎn)變化 用流動(dòng)相改性劑，如加三乙胺，或采用堿至鈍化柱;

3.鍵合相流失 同前(二)3;

4.流動(dòng)相組成變化 同前(二)4;

5.溫度降低 同前(二)5。

(四)出現(xiàn)肩峰或分叉

1.樣品體積過(guò)大 用流動(dòng)相配樣，總的樣品體積小于*峰的15%;

2.樣品溶劑過(guò)強(qiáng) 采用較弱的樣品溶劑;

3.柱塌陷或形成短路通道 更換色譜柱，采用較弱腐蝕性條件;

4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效 更換燒結(jié)不銹鋼，加在線過(guò)濾器，過(guò)濾樣品;

5.進(jìn)樣器損壞 更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子。

(五)鬼峰

1.進(jìn)樣閥殘余峰 每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥，改進(jìn)閥和樣品的清洗;

2.樣品中未知物 處理樣品;

3.柱未平衡 重新平衡柱，用流動(dòng)相作樣品溶劑(尤其是離子對(duì)色譜);

4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜)每天新配，用抗氧化劑;

5.水污染(反相)通過(guò)變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量，用hplc級(jí)的水。

(六) 基線噪聲

1.氣泡(尖銳峰) 流動(dòng)相脫氣，加柱后背壓;

2.污染(隨機(jī)噪聲) 清洗柱，凈化樣品，用HPLC級(jí)試劑;

3.檢測(cè)器燈連續(xù)噪聲 更換氘燈;

4.電干擾(偶然噪聲) 采用穩(wěn)壓電源，檢查干擾的來(lái)源(如水浴等);

5.檢測(cè)器中有氣泡 流動(dòng)相脫氣，加柱后背壓。

(七)峰拖尾

1.柱超載 降低樣品量，增加柱直徑采用較高容量的固定相;

2.峰干擾 清潔樣品，調(diào)整流動(dòng)相;

3.硅羥基作用 加三乙胺，用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相PH值，鈍化樣品;

4.死體積或柱外體積過(guò)大 連接點(diǎn)降至zui低，對(duì)所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整，盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管;

5.柱效下降 用較低腐蝕條件，更換柱，采用保護(hù)柱。

(八)峰展寬

1.進(jìn)樣體積過(guò)大 同(四)1;

2.在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展 進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散;

3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢 設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn);

4.檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)過(guò)大 設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣*峰半寬的10%;

5.流動(dòng)相粘度過(guò)高 增加柱溫，采用低粘度流動(dòng)相;

6.檢測(cè)池體積過(guò)大 用小體積池,卸下熱交換器;

7.保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng) 等度洗脫時(shí)增加溶劑含量也可用梯度洗脫;

8.柱外體積過(guò)大 將連接管徑和連接管長(zhǎng)度降至zui小;

9.樣品過(guò)載 進(jìn)小濃度小體積樣品。