一、原理

將動(dòng)物機(jī)體的各種組織從機(jī)體中取出，經(jīng)各種酶（常用）、螯合劑（常用EDTA）或機(jī)械方法處理，分散成單細(xì)胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長(zhǎng)和繁殖，這一過(guò)程稱原代培養(yǎng)。

二、儀器、材料及試劑

儀器：培養(yǎng)箱（調(diào)整至37℃），培養(yǎng)瓶、瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、紗布、手術(shù)器械、血球計(jì)數(shù)板、離心機(jī)、水浴箱（37℃）

材料：胎鼠或新生鼠

試劑：1640培養(yǎng)基（含20%小牛血清），0.25%，Hank’s液，碘酒

三、操作步驟

（一）消化法

1、器材：將孕鼠或新生小鼠拉頸椎致死，置75%酒精泡2—3秒鐘（時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)、以免酒精從口和肛門浸入體內(nèi)），再用碘酒消毒腹部，取胎鼠帶入超凈臺(tái)內(nèi)（或?qū)⑿律∈笤诔瑑襞_(tái)內(nèi)）解剖取肝臟，置平皿中。

2、用Hank’s液洗滌三次，并剔除脂肪，結(jié)締組織，血液等雜物。

3、用將肝臟剪成小塊（1mm2），再用Hank’s液洗三次，轉(zhuǎn)移至小瓶中。

4、視組織塊量加入5—6倍的0.25%液，37℃中消化20—40分鐘，每隔5分鐘振蕩一次，或用吸管吹打一次，使細(xì)胞分離。

5、加入3—5ml培養(yǎng)液以終止消化作用（或加入抑制劑）。

6、靜置5—10分鐘，使未分散的組織塊下沉，取懸液加入到離心管中。

7、1000rpm，離心10分鐘，棄上清液。

8、加入Hank’s液5ml，沖散細(xì)胞，再離心一次，棄上清液。

9、加入培養(yǎng)液l—2 ml（視細(xì)胞量），血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

10、將細(xì)胞調(diào)整到5×105/ml左右，轉(zhuǎn)移至25ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，37℃下培養(yǎng)。

上述消化分離的方法是zui基本的方法，在該方法的基礎(chǔ)上，可進(jìn)一步分離不同細(xì)胞。細(xì)胞分離的方法各實(shí)驗(yàn)室不同，所采用的消化酶也不相同（如膠原酶，透明質(zhì)酶等）。

（二）組織塊直接培養(yǎng)法

自上方法第3步后，將組織塊轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶，貼附與瓶底面。翻轉(zhuǎn)瓶底朝上，將培養(yǎng)液加至瓶中，培養(yǎng)液勿接觸組織塊。入37℃靜置3—5小時(shí)，輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使組織浸入培養(yǎng)液中（勿使組織漂起），37℃繼續(xù)培養(yǎng)。