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上海士鋒生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第14年

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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 維生素檢測(cè)培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測(cè)培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測(cè)培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測(cè)培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測(cè)培養(yǎng)基 化妝品檢測(cè)培養(yǎng)基 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗(yàn)培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測(cè)培養(yǎng)基 支原體檢測(cè)培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測(cè)培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測(cè)培養(yǎng)基 弧菌檢測(cè)培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測(cè)培養(yǎng)基 檢測(cè)培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測(cè)培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測(cè),增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

凝膠過濾實(shí)驗(yàn)方法

時(shí)間:2015-5-20閱讀:659
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1.凝膠的選擇

根據(jù)層析物質(zhì)分子量的大小選擇不同型號(hào)的凝膠,如除鹽和除游離的熒光素,則可選用粗、中粒度的G25或G50,G250多用于分離蛋白質(zhì)單體,G200多用于分離蛋白質(zhì)凝膠聚合體等。

2.凝膠的預(yù)處理

稱取適量的凝膠加入過量的緩沖液在冰箱(或室溫)中充分膨脹,或在沸水中煮,膨脹時(shí)間應(yīng)根據(jù)不同型號(hào)的凝膠而定。

凝膠量與型號(hào)和層析柱大小與規(guī)格及凝膠用量


層析柱規(guī)格 & @- q1 P( c' }* d 凝膠的規(guī)格和用量( g )
直徑( cm)高( cm)容量( ml ) & L) Q+ ^/ `" iG25 1 g. l% A5 @& s4 m" _0 ^* CG50 , k3 L) X! ?% Y- _. ?* A; fG100 0 K" k" G" q. ?: W+ ~  nG200
0.915 ; N7 d) E3 u$ |8 t, d6 b$ R( x7 H8 {9.52.5 10.6 ( c, i" m, x; i2 p$ I# C3 B0.3
0.930 / p5 J5 L+ x, [& r+ A! R" T19 " M! z+ a* E' R0 Q6 b5 j5 $21.20.6 '
0.960 2 e$ x7 x+ H: s, { 38 . U: R7 D- Q8 _ 104 $ V/ ?- `1 G" |( F, | 2.51.2
1.6 $ \6 T# E! b5 r. J6 ^9 y" n 20 40 10 . Y8 s- V7 V) N/ d 4 7 @) o3 u$ u" g$ y 2.5 + v, _1 z( R# {, V& Y) Y, N# j7 ~ 1.2
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35149.0 . m# H$ W4 D0 i7 | 4.4
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為使粒子均勻一致需進(jìn)行浮選,即加入凝膠粒子后,輕輕攪拌,靜置20min,傾去沉淀的粒子,如此反復(fù)數(shù)次即可。


3.裝柱

層析柱的選擇一般根據(jù)分離樣品的種類和樣品的數(shù)量而定。純化蛋白質(zhì)時(shí),柱床體積應(yīng)為樣品體積的25~100倍。去鹽、游離熒光素約為樣品體積的4~10倍。柱太短,影響分離效果。柱長(zhǎng)一些,分離效果好,但柱太長(zhǎng),則延長(zhǎng)分離時(shí)間,樣品也稀釋過度。層析柱的內(nèi)徑也要選擇適當(dāng)。內(nèi)徑過細(xì),會(huì)發(fā)生“器壁效應(yīng)",即靠近管壁的流速要大于中心的流速影響分離效果。所以層析柱的內(nèi)徑和高度應(yīng)有一定的比例。對(duì)于除鹽來說應(yīng)為1:5~1:25;對(duì)于純化蛋白質(zhì)來說應(yīng)為1:20~1:100。

4.加樣與洗脫

樣品體積不宜過多,為床體積的1%~5%,zui多不要超過10%。樣品濃度也不宜過大,濃度過大粘度大,分離效果差,一般不超過4%。

洗脫液應(yīng)與膨脹一致,否則更換溶劑,凝膠體積會(huì)發(fā)生變化,影響分離效果。洗脫液要有一定的離子強(qiáng)度和pH值。分離血清蛋白常用0.02~0.1Mol/LpH6.9~8.0的PBS液(0.14Mol/LNaCl)和0.1Mol/LpH8.0Tris-HCl緩沖鹽溶液(0.14Mol/LNaCl)。

5.洗脫液收集

利用自動(dòng)分步收集器收集,并以20%磺基水楊酸測(cè)試,當(dāng)?shù)鞍滓合聛頃r(shí),開始分管收集,至無蛋白液為止。

6.凝膠柱的重復(fù)使用與保存

當(dāng)樣品的各組分全部洗脫下來之后,即可加入新的樣品,繼續(xù)使用。保存方法有三種:

(1)在液相中保存zui方便,即于凝膠懸液中加入防腐劑(如0.002%洗必泰)或高壓滅菌后4℃保存。此法至少可以保存半年以上。

(2)用完后,以水沖洗,然后用60%~70%酒精液沖洗,凝膠體積縮小,即在半收縮狀態(tài)下保存。

(3)不用者,以干燥狀態(tài)保存,即水洗凈后,用含乙醇的水洗,逐漸加大乙醇用量,zui后用95%的乙醇洗,可全部去水,再用乙烯去除乙醇,抽濾干,于60℃~80℃干燥后保存。加乙醇時(shí),切忌一上來就用濃乙醇處理,以防結(jié)塊。

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