實(shí)驗(yàn)?zāi)康?nbsp;
制備出感受態(tài)細(xì)胞，把體外重組的DNA引入受體細(xì)胞，使受體菌具有新遺傳性，并從中選擇出轉(zhuǎn)化子。

實(shí)驗(yàn)原理 
感受態(tài)就是細(xì)菌吸收轉(zhuǎn)化因子的生理狀態(tài)，只有發(fā)展為感受態(tài)的細(xì)胞才能穩(wěn)定攝取外來(lái)的DNA分子。pUC18的LacZ基因區(qū)域當(dāng)有dna片段插入時(shí)，LacZ基因失活，轉(zhuǎn)化進(jìn)入大腸桿菌并在含有IPTG和X-gal培養(yǎng)基生長(zhǎng)時(shí)，會(huì)產(chǎn)生白色的克隆，不含插入片段的pUC18質(zhì)粒進(jìn)入宿主細(xì)胞生成藍(lán)色菌落。 

實(shí)驗(yàn)操作 
（一）受體菌的培養(yǎng)與CaCl2處理（無(wú)菌操作） 
1、取0.3ml種子液接到裝有30 ml LB液體培養(yǎng)基的三用瓶中，振蕩培養(yǎng)2-2.5小時(shí) 
2、取出一定量菌液置于冰浴10分鐘 
3、4,000rpm，4℃離心5分鐘，收集菌體 
4、把菌體懸浮在4 ml 100mM冷CaCl2中，冰浴25分鐘。 
5、5,000rpm，4℃離心5分鐘，收集菌體 
6、再把菌體懸浮在1ml 100 mM冷CaCl2中置4 ℃ 12-24小時(shí)，備用。 

（二）倒皿鋪平板 
1、按照各組轉(zhuǎn)化反應(yīng)的混合物 
控制不同的選擇性培養(yǎng)基(20 ml/皿) 
LB固體培養(yǎng)基(100 ml)+Amp（60μg/ml）+Tet(40μg/ml)供連接混合物轉(zhuǎn)化，pUC18轉(zhuǎn)化用, 共5皿 
LB固體培養(yǎng)基 (100 ml)+Amp (60μg/ml)+X-gal (40μg/ml)+IPTG(24μg/ml),供連接混合物轉(zhuǎn)化，pUC18轉(zhuǎn)化用,共5皿 
2、轉(zhuǎn)化反應(yīng)前一天，先鋪好平板 
3、取各組反應(yīng)物在平板上涂布 
4、培養(yǎng)皿倒置于37℃培養(yǎng)箱中過(guò)夜 
5、觀察轉(zhuǎn)化子出現(xiàn)的情況 

(三) 轉(zhuǎn)化反應(yīng) 
待轉(zhuǎn)化DNA的準(zhǔn)備 
我們需將連接混合物，提取的pUC18兩種樣品作轉(zhuǎn)化反應(yīng)，按下表準(zhǔn)備

取上述兩組混合物在Eppendorf管中，按如下處理：
1、將各組Eppendorf管置冰浴/小時(shí)以上
2、把上述樣品置42℃水浴中，2分鐘
3、轉(zhuǎn)移到37℃水浴中5分鐘，加800μl LB液體培養(yǎng)基
4、在37℃搖床上振蕩培養(yǎng)1小時(shí)，取25μl涂皿