1.原理
首先獲得ES細(xì)胞系,利用同源重組技術(shù)獲得帶有研究者預(yù)先設(shè)計突變的中靶ES細(xì)胞。通過顯微注射或者胚胎融合的方法將經(jīng)過遺傳修飾的ES細(xì)胞引入受體胚胎內(nèi)。經(jīng)過遺傳修飾的ES細(xì)胞仍然保持分化的性,可以發(fā)育為嵌合體動物的生殖細(xì)胞,使得經(jīng)過修飾的遺傳信息經(jīng)生殖系遺傳。獲得的帶有特定修飾的突變動物提供研究者一個特殊的研究體系,使他們可以在生物活體中研究特定基因的功能。目前,在ES細(xì)胞進(jìn)行同源重組己經(jīng)成為一種對小鼠染色體組上任意位點進(jìn)行遺傳修飾的常規(guī)技術(shù)。通過基因打靶獲得的突變小鼠己經(jīng)超過千種(相關(guān)數(shù)據(jù)庫參見文獻(xiàn)),并正以每年數(shù)百種的速度增加。通過對這些突變小鼠的表型分析,許多與人類疾病相關(guān)的新基因的功能已得到闡明,并直接導(dǎo)致了現(xiàn)代生物學(xué)研究各個領(lǐng)域中許多突破性的進(jìn)展。
2.實驗流程
3.特點
基因打靶技術(shù)是一種定向改變生物活體遺傳信息的實驗手段。通過對生物活體遺傳信息的定向修飾包括基因滅活、點突變引人、缺失突變、外源基因定位引入、染色體組大片段刪除等,并使修飾后的遺傳信息在生物活體內(nèi)遺傳,表達(dá)突變的性狀,從而可以研究基因功能等生命科學(xué)的重大問題,以及提供相關(guān)的疾病治療、新藥篩選評價模型等。基因打靶技術(shù)的發(fā)展己使得對特定細(xì)胞、組織或者動物個體的遺傳物質(zhì)進(jìn)行修飾成為可能。
4.應(yīng)用
基因打靶技術(shù)在基因功能研究中的應(yīng)用、應(yīng)用基因打靶技術(shù)研制人類疾病動物模型、應(yīng)用基因打靶技術(shù)改良動物品系和研制動物反應(yīng)器等。