血清的熱滅活是很多培養(yǎng)者感興趣的話題，價(jià)格不菲的血清中含有諸如生長(zhǎng)因子，維生素，氨基酸等珍貴物質(zhì)，而將它們置于50℃以上的溫度長(zhǎng)達(dá)30分鐘是*沒有必要的。盡管如此，在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室之中血清的熱滅活還是作為常規(guī)來(lái)執(zhí)行，多數(shù)實(shí)驗(yàn)者并沒有考慮熱處理對(duì)血清中的生長(zhǎng)因子，氨基酸等成分帶來(lái)的負(fù)面影響，在我們的技術(shù)中zui常被提到的就是否該對(duì)血清進(jìn)行熱滅活，下面我們就對(duì)胎牛血清的熱滅活進(jìn)行一些探討和解釋。
根據(jù)調(diào)查，至少70％的研究者對(duì)血清的滅活僅僅是因?yàn)樽裾粘Ｒ?guī)操作，或者說認(rèn)為是理所當(dāng)然的。常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,而時(shí)間則從15分鐘到60分鐘不等.其中zui常用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著血清采集、處理、加工工藝的提高，許多早先認(rèn)為是熱滅活的原因已經(jīng)不再成立，只有少數(shù)對(duì)血清進(jìn)行熱滅活的研究者在實(shí)驗(yàn)中證實(shí)了這一步驟的有效性和必要性。
Pinyopummintr等證明血清去除滅活步驟不影響牛胚胎的發(fā)育分化［2］；有研究結(jié)果［3］證實(shí)熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對(duì)細(xì)胞的促粘附作用，在用SV-BHK、BALB-3T3、CV－1、FS-4細(xì)胞對(duì)細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)中，熱滅活對(duì)胎牛血清的影響小于對(duì)小牛血清的影響。
我們調(diào)查了熱滅活對(duì)胎牛血清以及對(duì)其中不同細(xì)胞株生長(zhǎng)能力的影響。通過比較11個(gè)不同細(xì)胞株，發(fā)現(xiàn)其中熱滅活對(duì)6 個(gè)細(xì)胞株（HBAE，MDBK，Vero，成纖維細(xì)胞，MRC-5）的生長(zhǎng)帶來(lái)負(fù)面影響，三個(gè)細(xì)胞株（FOX-NY，MDCK和CHO-K1）不受熱滅活的影響，而只有兩個(gè)細(xì)胞株（Balb/3T3，Sp2/0Ag14 hybrid），在熱滅活之后，細(xì)胞生長(zhǎng)有輕微的改善。所以，在正常的操作下，熱滅活通常對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)沒有明顯的促進(jìn)作用。
在正常操作下，熱滅活經(jīng)常給血清產(chǎn)品帶來(lái)負(fù)面的影響，對(duì)血清的加熱經(jīng)常導(dǎo)致血清中沉淀的產(chǎn)生，而導(dǎo)致的沉淀又常常被認(rèn)為是微生物的污染。注意到這個(gè)現(xiàn)象之后，為了驗(yàn)證污染的存在，或者促進(jìn)沉淀的溶解，許多培養(yǎng)者往往將血清放置37℃溫育。這卻往往使情況變得更糟，血清中的蛋白進(jìn)一步的析出，為了確信血清未被污染，進(jìn)行的鏡檢，無(wú)菌培養(yǎng)試驗(yàn)，和革蘭氏染色試驗(yàn)更是浪費(fèi)了實(shí)驗(yàn)者大量的時(shí)間和精力。
總之，多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)中血清的熱滅活并不是必要的。很多場(chǎng)合下，熱滅活并不會(huì)改善細(xì)胞的生長(zhǎng)，卻降低了支持細(xì)胞生長(zhǎng)的能力。即使在少數(shù)有促進(jìn)的情況下，其促進(jìn)的比率也是微不足道的。另外，血清的熱滅活導(dǎo)致的沉淀常常被認(rèn)為是微生物的污染，從而給用戶和供應(yīng)商都帶來(lái)不必要的麻煩。我們建議，對(duì)于那些對(duì)血清進(jìn)行滅活的用戶，需要通過試驗(yàn)來(lái)證實(shí)其必要性，確定滅活的適當(dāng)條件；在滅活過程中，需要嚴(yán)格認(rèn)真監(jiān)測(cè)，并選擇一個(gè)可重復(fù)的方案進(jìn)行操作。
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