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技術(shù)文章

細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)

點(diǎn)擊次數(shù):3934 發(fā)布時(shí)間:2012-7-26

 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)

 
材料:
 
6孔板
 
marker筆
 
直尺
 
20微升槍頭(滅菌)
 
無血清培養(yǎng)基
 
PBS
 
準(zhǔn)備:
 
所有能滅菌的器械都要滅菌,直尺和marker筆在操作前紫外照射30min(超凈臺(tái)內(nèi))
 
流程:
 
1、先用marker筆在6孔板背后,用直尺比著,均勻地劃?rùn)M線,大約每隔0.5~1cm一道,橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。
 
2、在空中加入約5X105個(gè)細(xì)胞,具體數(shù)量因細(xì)胞不同而不同,掌握為過夜能鋪滿。
 
3、第二天用槍頭比著直尺,盡量垂直于背后的橫線劃痕,槍頭要垂直,不要傾斜。
 
4、用PBS洗細(xì)胞3次,去除劃下的細(xì)胞,加入無血清培養(yǎng)基。
 
5、放入37℃5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。按0、6、12、24小時(shí)取樣,拍照。

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