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人輪狀病毒IgA（RV-IgA）酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說(shuō)明書
本試劑盒僅供研究使用。 48T
藥品名稱：
通用名：人輪狀病毒 IgA（RV-IgA ）酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的：
本試劑盒定性測(cè)定人血液、或其它相關(guān)組織中輪狀病毒 IgA（RV-IgA ）。
實(shí)驗(yàn)原理：
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA ）測(cè)定標(biāo)本中人輪狀病毒IgA（RV-IgA ）。
用純化的輪狀病毒 IgA（RV-IgA ）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中輪狀病毒
IgA（RV-IgA ）抗原相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的輪狀病
毒 IgA（RV-IgA ）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB
顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀
在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），與 CUTOFF 值相比較，從而判定標(biāo)本中人輪狀病毒
IgA（RV-IgA ）的存在與否。
試劑盒組成：
1 20 倍濃縮洗滌液 20ml ×1 瓶 7 終止液 3ml ×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑 3ml ×1/瓶 8 陽(yáng)性對(duì)照 0.5ml ×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板 12 孔×4 條 9 陰性對(duì)照 0.5ml ×1 瓶
4 樣品稀釋液 3ml ×1 瓶 10 說(shuō)明書 1 份
5 顯色劑 A 液 3ml ×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑 B 液 3ml ×1 瓶 12 密封袋 1 個(gè)
標(biāo)本要求：
1．標(biāo)本處理：血清、血漿標(biāo)本可直接檢測(cè)
2 ．標(biāo)本按要求制備后盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如不能及時(shí)檢測(cè)，可將標(biāo)本在-20℃保存一個(gè)月，
但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP ）活性。
操作步驟：
1. 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1
孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照（標(biāo)準(zhǔn)品）50μl。然后在待測(cè)
樣品孔先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測(cè)樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，
盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液加蒸餾水至 600ml 后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3 。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘
10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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結(jié)果判定：
試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.15
臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值= 陰性對(duì)照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為輪狀病毒IgA（RV-IgA ）陰性
陽(yáng)性判定：樣品OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為輪狀病毒IgA（RV-IgA ）陽(yáng)性
注意事項(xiàng)
1．操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
2 ．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3 ．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
4 ．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5 ．底物請(qǐng)避光保存。
6 ．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，參考波長(zhǎng)為630nm
7 ．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸，使用時(shí)必須
注意安全。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2 ．有效期：6 個(gè)月
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