人抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO-Ab）實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中人抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO-Ab）水平。用
純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被單抗的微孔中依次加入抗甲狀腺過氧化物酶
抗體（TPO-Ab），再與HRP 標(biāo)記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過*洗
滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終
的黃色。顏色的深淺和樣品中的抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO-Ab）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在
450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人抗甲狀腺過氧化物酶抗體
（TPO-Ab）濃度。
人抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO-Ab）操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
160mU/L 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
80mU/L 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
40mU/L 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
20mU/L 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10mU/L 1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，
然后再加待測(cè)樣品 10 µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此
重復(fù)5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50µl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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