大鼠αL巖藻糖苷酶（AFU）實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠αL 巖藻糖苷酶（AFU）水平。用純化的大
鼠αL 巖藻糖苷酶（AFU）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入
αL 巖藻糖苷酶（AFU），再與 HRP 標(biāo)記的αL 巖藻糖苷酶（AFU）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原
-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，
并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的αL 巖藻糖苷酶（AFU）呈正相
關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠αL 巖
藻糖苷酶（AFU）濃度。
大鼠αL巖藻糖苷酶（AFU）試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品（800U /L） 0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板 12孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5 ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑 B 液 6ml×1/ 瓶 12 密封袋 1 個
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含 NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP ）活性。
大鼠αL巖藻糖苷酶（AFU）操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
400 U/L 5 號標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
200 U/L 4 號標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100 U/L 3 號標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50 U/L 2 號標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
25 U/L 1 號標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，
然后再加待測樣品 10 µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此
重復(fù)5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50µl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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