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大鼠總*（TC）操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
8nmol/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液
4nmol/L 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
2nmol/L 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
1nmol/L 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
0.5nmol/L 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，
然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此
重復(fù)5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50 μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止
液后15分鐘以內(nèi)進行。
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大鼠總*（TC）計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的
OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實際濃度。
