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雞禽流感H9抗原（AIV-H9 Ag）操作步驟
1. 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1
孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照50μl 。然后在待測(cè)樣品孔先
加樣品稀釋液 40μl ，然后再加待測(cè)樣品 10μl 。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不
觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此
重復(fù)5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50 μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
雞禽流感H9抗原（AIV-H9 Ag）計(jì)算和結(jié)果判定：
試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10
臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品 OD值< 臨界值（CUT OFF）者為禽流感H9抗原（AIV-H9 Ag）陰性
陽(yáng)性判定：樣品 OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為禽流感H9抗原（AIV-H9 Ag）陽(yáng)性
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