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電泳用SYBR Green I 使用方法簡介

一、SYBR Green I預(yù)染色方法 1、該方法適于瓊脂糖凝膠電泳和PAGE凝膠電泳。 2、工作液的配制：用電泳緩沖液將10000×的SYBR GreenⅠ稀釋100倍，即為SYBR GreenⅠ工作液。SYBR GreenⅠ工作液可以置2-8℃冷藏一個(gè)月以上。 3、制膠：按常規(guī)方法制膠，不含任何染料。 4、樣品染色：向分析樣品中加入SYBR GreenⅠ工作液和載樣緩沖液，室溫放置10分鐘，使SYBR GreenⅠ與樣品中DNA充分結(jié)合。SYBR GreenⅠ工作液加入量為總上樣量的1/10。 5、DNA Marker染色：將5μL DNA Marker和5μL DNA Marker稀釋液和1-2μL SYBR GreenⅠ工作液混勻，室溫放置5分鐘，使SYBR GreenⅠ與DNA充分結(jié)合。 6、上樣、電泳：按常規(guī)操作。

二、SYBR Green I后染方法 1、按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。 2、 用PH 7.0 - 8.5 的緩沖液（如：TAE，TBE 或 TE），按照10000：1的比例稀釋SYBR GreenⅠ濃縮液，混勻，制成染色溶液。 3、 將染色溶液倒入合適的聚丙烯容器中，放入凝膠，用鋁箔等蓋住容器使染料避光。室溫振蕩染色10-30分鐘，染色時(shí)間因凝膠濃度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝膠直接在玻璃平皿上染色，將配好的工作溶液輕輕地倒在膠板上，讓工作液均勻地覆蓋整個(gè)膠板，并染色30分鐘。玻璃平皿必須預(yù)先經(jīng)過硅烷化溶液處理（避免染料吸附在玻璃表面上）。 三、SYBR Green I使用注意事項(xiàng) 1、 在"SYBR GreenⅠ預(yù)染色方法"中，電泳時(shí)間不要超過2小時(shí)，否則SYBR GreenⅠ會(huì)從DNA上分離出來，會(huì)產(chǎn)生彌散狀條帶。 2、在常規(guī)用酒精沉淀核酸的過程中，SYBR Green I 可以全部從雙鏈核酸上去掉。 3、如果想對(duì)用 SYBR Green I 染過的膠進(jìn)行 Southern blots，建議在預(yù)雜化和雜化溶液中加入 0.1%- 0.3% 的SDS。 4、 在紫外照射透視下，與雙鏈 DNA 接合的 SYBR Green I 呈現(xiàn)綠色熒光。如果膠中含有單鏈 DNA 則顏色為橘黃而不是綠色。 5、 SYBR Green 對(duì)玻璃和非聚丙烯材料具有一定親合力。建議在稀釋、貯存、染色等使用過程中用聚丙烯類容器。