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吡啰紅甲基綠染色液
點(diǎn)擊次數(shù)：516 發(fā)布時(shí)間：2013-11-13
1、原理與解析
（1）真核細(xì)胞的DNA主要分布在細(xì)胞核內(nèi)，RNA主要分布在細(xì)胞質(zhì)中。
（2）甲基綠和吡羅紅兩種染色劑對(duì)DNA和RNA的親和力不同，甲基綠對(duì)DNA親和力強(qiáng)，使DNA顯現(xiàn)出綠色，而吡羅紅對(duì)RNA的親和力強(qiáng)，使RNA呈現(xiàn)出紅色。用甲基綠、吡羅紅的混合染色劑將細(xì)胞染色，可同時(shí)顯示DNA和RNA在細(xì)胞中的分布。
（3）鹽酸的作用
① 鹽酸能改變細(xì)胞膜的通透性，加速染色劑的跨膜運(yùn)輸；
② 鹽酸使染色體中的DNA與蛋白質(zhì)分離，便于DNA與染色劑的結(jié)合。
注意事項(xiàng)
1.材料的選擇
① 選用的實(shí)驗(yàn)材料既要容易獲得，又要便于觀察；
② 常用的觀察材料由人的口腔上皮細(xì)胞、洋蔥鱗片葉表皮細(xì)胞（為避免原有顏色的干擾，不可使用紫色表皮細(xì)胞）
2.取材要點(diǎn)
① 取口腔上皮細(xì)胞之前，應(yīng)先漱口，以避免裝片中出現(xiàn)太多的雜質(zhì)；
② 取洋蔥表皮細(xì)胞時(shí)，盡量避免材料上帶有葉肉組織細(xì)胞。
3.沖洗載玻片時(shí)水的流速要盡量慢，切忌直接用水沖洗。
4.安全要點(diǎn)
① 用酒精燈烘烤載玻片時(shí)，不要只集中于材料處，而應(yīng)將載玻片在火焰上來回移動(dòng)，使載玻片均勻受熱，以免破裂；
② 烘烤后的載玻片不要馬上放入盛有*的燒杯中，先自然冷卻1分鐘。
5.換用高倍鏡觀察材料時(shí)，只能用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋進(jìn)行調(diào)焦，切不可動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋。
主要步驟（以觀察口腔上皮細(xì)胞為例）
1.取材
① 滴： 在潔凈的載玻片上滴一滴質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9%的NaCl溶液；
② 刮： 用消毒牙簽在口腔內(nèi)側(cè)壁上輕輕地刮幾下；
③ 涂： 將牙簽上的碎屑涂抹在載玻片的生理鹽水中；
④ 烘： 將涂有口腔上皮細(xì)胞的載玻片在酒精燈的火焰上烘干。
2.水解
① 解： 將烘干的載玻片放入裝有30ml質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8%的鹽酸的小燒杯中，進(jìn)行材料的水解；
② 保： 將小燒杯放入裝有30℃溫水的大燒杯中保溫5分鐘。
3.沖洗涂片
① 沖： 用緩緩的蒸餾水沖洗載玻片10秒鐘；
② 吸： 用吸水紙吸去載玻片上的水分。
4.染色
① 染：用2滴吡羅紅甲基綠混合染色劑滴在載玻片上，染色5分鐘；
② 吸： 吸去多余染色劑；
③ 蓋： 蓋上蓋玻片。
5.觀察
① 低： 在低倍物鏡下，尋找染色均勻，色澤淺的區(qū)域，移至視野*，將物像調(diào)節(jié)清晰；
② 高： 轉(zhuǎn)到高倍物鏡，調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，觀察細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的染色情況。