依據(jù)WHO要求，應(yīng)當(dāng)用小鼠攻毒試驗(yàn)檢測(cè)狂犬病疫苗效價(jià)。該實(shí)驗(yàn)方法zui早起源于美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院（NIH），因此該實(shí)驗(yàn)也被稱(chēng)為NIH檢測(cè)。在該檢測(cè)中，通過(guò)與疫苗標(biāo)準(zhǔn)品的比較，來(lái)檢測(cè)一種疫苗對(duì)于狂犬病毒感染的保護(hù)力。在歐洲，NIH檢測(cè)被強(qiáng)制應(yīng)用于人用狂犬病疫苗效價(jià)的檢測(cè)，一種改進(jìn)的檢測(cè)程序則推薦應(yīng)用于獸用狂犬病疫苗的效價(jià)檢測(cè)。

歐洲藥典規(guī)定用以下的程序檢測(cè)滅活的獸用狂犬病疫苗效價(jià)。包括標(biāo)準(zhǔn)參考品疫苗在內(nèi)的待檢測(cè)疫苗至少設(shè)置3個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度分組至少檢測(cè)10個(gè)動(dòng)物。各個(gè)稀釋度分組中每支小鼠腹腔免疫0.5ml。免疫后的第14天，所有小鼠腦內(nèi)注射至少10 LD50劑量的狂犬病毒。記錄死亡或者表現(xiàn)狂犬病癥狀的小鼠的數(shù)量，然后根據(jù)小鼠的存活率計(jì)算相對(duì)效價(jià)。只有當(dāng)小鼠攻毒試驗(yàn)符合歐洲藥典規(guī)定的一系列標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，該實(shí)驗(yàn)才被認(rèn)為具有檢測(cè)的效力。只有當(dāng)一種疫苗效價(jià)每劑至少達(dá)到1 IU時(shí)，該疫苗才符合要求。

NIH檢測(cè)由于其不性以及顯著的變異性被業(yè)界廣泛批評(píng)。已經(jīng)報(bào)道，NIH檢測(cè)結(jié)果在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)和實(shí)驗(yàn)室間差異的曾有報(bào)導(dǎo)高達(dá)10倍。而且，該實(shí)驗(yàn)不能滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)方面的所有要求也是共性的問(wèn)題。某一擁有長(zhǎng)期檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)的*參考實(shí)驗(yàn)室報(bào)道，42%的NIH疫苗效價(jià)檢測(cè)試驗(yàn)不能符合試驗(yàn)有效性標(biāo)準(zhǔn)。而且，NIH檢測(cè)在倫理學(xué)和實(shí)踐性方面也是受到質(zhì)疑的。首先，該實(shí)驗(yàn)采用腹腔注射導(dǎo)致試驗(yàn)動(dòng)物嚴(yán)重的損傷。其次，對(duì)照組和接種zui低稀釋度疫苗組的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生狂犬病癥狀，zui終在攻毒試驗(yàn)中死亡。而且，NIH檢測(cè)需要很多實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，費(fèi)時(shí)（4周）而且價(jià)格不菲。此外，在攻毒實(shí)驗(yàn)中存在實(shí)驗(yàn)室工作人員暴露的風(fēng)險(xiǎn)。

1984年WHO專(zhuān)家咨詢(xún)委員會(huì)意識(shí)到，目前的狂犬病疫苗效價(jià)檢測(cè)方法不能提示新疫苗的免疫保護(hù)力，并且明確提出改進(jìn)或者替代NIH檢測(cè)的要求。其它的機(jī)構(gòu)亦要求替代小鼠攻毒試驗(yàn)。一種適宜的備選方法應(yīng)該滿足以下的要求：1.　對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造成更少的損傷而且所需動(dòng)物數(shù)量更少。2. 更少的試驗(yàn)不確定性。3. 更快而且更容易操作。

根據(jù)歐洲藥典要求，作為小鼠攻毒試驗(yàn)的替代，血清學(xué)檢測(cè)可以被用于常規(guī)獸用狂犬病疫苗效價(jià)檢測(cè)。該血清學(xué)檢測(cè)每組至少免疫5只小鼠，免疫的劑量推薦為1/5檢測(cè)疫苗劑量或者在小鼠攻毒預(yù)試驗(yàn)中摸索出的一系列令人滿意的疫苗稀釋度。免疫途徑可以是皮下或者肌肉注射。注射后的第14天，采集血樣，并且通過(guò)RFFIT來(lái)檢測(cè)每個(gè)樣品中的狂犬病毒中和抗體。只有當(dāng)一種疫苗免疫產(chǎn)生的中和抗體效價(jià)不少于標(biāo)準(zhǔn)品疫苗產(chǎn)生的中和抗體效價(jià)時(shí)，該疫苗才符合效價(jià)要求。

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血清學(xué)檢測(cè)很顯然地帶給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物更少的損傷，需要更少的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。但是，到目前為止，這種試驗(yàn)方法還沒(méi)有被疫苗制造商和*實(shí)驗(yàn)室廣泛采用。幾個(gè)研究機(jī)構(gòu)已經(jīng)證實(shí)NIH檢測(cè)中小鼠的存活率與用RFFIT或者血清中和試驗(yàn)檢測(cè)的小鼠狂犬病毒中和抗體效價(jià)有很好的相關(guān)性。RFFIT被進(jìn)一步證明是一種具有很高重復(fù)性的試驗(yàn)方法。它通過(guò)測(cè)定狂犬病毒中和抗體保護(hù)培養(yǎng)細(xì)胞免遭狂犬病毒標(biāo)準(zhǔn)攻擊毒株感染的能力，來(lái)檢測(cè)血清狂犬病毒中和抗體效價(jià)。然而，目前還沒(méi)有關(guān)于歐洲藥典推薦的兩種檢測(cè)方法（NIH和RFFIT）之間的全面比較。

在本研究中，我們驗(yàn)證了小鼠攻毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果與歐洲藥典規(guī)定的血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果之間的相關(guān)性。而且，我們已經(jīng)證實(shí)，血清學(xué)檢測(cè)對(duì)常規(guī)疫苗質(zhì)控的適宜性以及檢測(cè)不符合質(zhì)控要求的低效價(jià)疫苗的能力。此外，我們研究了這種替代方法的可行性，確定了應(yīng)當(dāng)優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)參數(shù)。本研究的總的目標(biāo)是推進(jìn)用血清學(xué)檢測(cè)替代小鼠攻毒試驗(yàn)檢測(cè)。