試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍：                                                          96T

0.6μg/L -16μg/L

使用目的：

本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中25羥基*3（25（OH）D3）含量。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人25羥基*3（25（OH）D3）水平。用純化的人25羥基*3（25（OH）D3）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入25羥基*3（25（OH）D3），再與HRP標(biāo)記的25羥基*3（25（OH）D3）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的25羥基*3（25（OH）D3）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人25羥基*3（25（OH）D3）濃度。

試劑盒組成

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1瓶

7

終止液

6ml×1瓶

2

酶標(biāo)試劑

6ml×1瓶

8

標(biāo)準(zhǔn)品（32μg/L）

0.5ml×1瓶

3

酶標(biāo)包被板

12孔×8條

9

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1.5ml×1瓶

4

樣品稀釋液

6ml×1瓶

10

說明書

1份

5

顯色劑A液

6ml×1瓶

11

封板膜

2張 

6

顯色劑B液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1個(gè)

標(biāo)本要求

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

16μg/L

5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

8μg/L

4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

4μg/L

3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2μg/L

2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1μg/L

1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
溫育：操作同3。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

操作程序總結(jié)：

計(jì)算

  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

注意事項(xiàng)

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

請(qǐng)每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請(qǐng)避光保存。

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個(gè)月

公司相關(guān)產(chǎn)品：

小鼠粘蛋白/粘液素7（MUC7）ELISA試劑盒  Mouse Mucin-7,MUC7 ELISA試劑盒
小鼠嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白（ECP）ELISA試劑盒  Mouse eosinophil cationic protein,ECP ELISA試劑盒 
小鼠Qa淋巴細(xì)胞抗原2（Qa-2）ELISA試劑盒  Mouse Qa lymphocyte antigen 2 region,Qa-2 ELISA試劑盒
小鼠D-乳酸脫氫酶（D-LDH）ELISA試劑盒  Mouse D-Lactate Dehydrogenase,D-LDH ELISA試劑盒 
小鼠孕酮受體（PROGR）ELISA試劑盒  Rat Progesterone receptor,PROGR ELISA試劑盒
小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白6（IGFBP-6）ELISA試劑盒  Mouse Insulin-like growth factor binding protein 6,IGFBP-6 ELISA試劑盒 
小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子（PARC/CCL18）ELISA試劑盒  Mouse pulmonary activation regulated chemokine,PARC ELISA試劑盒
小鼠*（LZM）ELISA試劑盒  Mouse Lysozyme,LZM ELISA試劑盒 
小鼠β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白（β-Cat）ELISA試劑盒  Mouse β-catenin,β-cat ELISA試劑盒
小鼠骨退化特異標(biāo)志物（CTX-2）ELISA試劑盒  Mouse CTX-2 ELISA試劑盒
小鼠垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽（PACAP）ELISA試劑盒  Mouse pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP ELISA試劑盒 
小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）ELISA試劑盒  Mouse Angiotensin converting enzyme,ACE ELISA試劑盒
小鼠血管緊張素Ⅱ（ANG-Ⅱ）ELISA試劑盒  Mouse angiotension Ⅱ,ANG-Ⅱ ELISA試劑盒
小鼠角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子（KAF）/雙調(diào)蛋白（AR）ELISA試劑盒  Mouse keratinocyte autocrine factor/Amphiregulin,KAF/AR ELISA試劑盒
小鼠活化素A（ACV-A）ELISA試劑盒  Mouse Activin A,ACV-A ELISA試劑盒
小鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）ELISA試劑盒  Mouse Brain derived neurotrophic facor,BDNF ELISA試劑盒
小鼠骨成型蛋白2（BMP-2）ELISA試劑盒  Mouse Bone morphogenetic protein 2,BMP-2 ELISA試劑盒
小鼠骨成型蛋白4（BMP-4）ELISA試劑盒  Mouse Bone morphogenetic protein 4,BMP-4 ELISA試劑盒
小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白6（IGFBP-6）ELISA試劑盒  Mouse Insulin-like growth factor binding protein 6,IGFBP-6 ELISA試劑盒 
小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白1δ（MIP-1δ/CCL15）ELISA試劑盒  Mouse Macrophage Inflammatory Protein 1δ,MIP-1δ ELISA試劑盒 
小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子（PARC/CCL18）ELISA試劑盒  Mouse pulmonary activation regulated chemokine,PARC ELISA試劑盒
小鼠*（LZM）ELISA試劑盒  Mouse Lysozyme,LZM ELISA試劑盒 
小鼠可溶性CD30（sCD30）ELISA試劑盒  Mouse soluble cluster of differentiation 30,sCD30 ELISA試劑盒
小鼠可溶性肌球蛋白重鏈2（sMHC-2）ELISA試劑盒  Mouse soluble myosin heavy chain 2,sMHC-2 ELISA試劑盒
小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1（sMHC-1）ELISA試劑盒  Mouse soluble myosin heavy chain 1,sMHC-1 ELISA試劑盒
小鼠粘蛋白/粘液素C（MUCC） ELISA試劑盒  Mouse Mucin-5 subtype AC,MUCC ELISA試劑盒
小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）ELISA試劑盒 Mouse Angiotensin converting enzyme,ACE ELISA試劑盒
小鼠血管緊張素Ⅱ（ANG-Ⅱ）ELISA試劑盒 Mouse angiotension Ⅱ,ANG-Ⅱ ELISA試劑盒
小鼠角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子（KAF）/雙調(diào)蛋白（AR）ELISA試劑盒 Mouse keratinocyte autocrine factor/Amphiregulin,KAF/AR ELISA試劑盒
小鼠活化素A（ACV-A）ELISA試劑盒 Mouse Activin A,ACV-A ELISA試劑盒
小鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO-Ab）ELISA試劑盒  Mouse anti-Thyroid-Peroxidase antibody,TPO-Ab ELISA試劑盒 
小鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）ELISA試劑盒 Mouse Brain derived neurotrophic facor,BDNF ELISA試劑盒
小鼠凋亡誘導(dǎo)因子（AIF）ELISA試劑盒  Mouse apoptosis inducing factor,AIF ELISA試劑盒 
小鼠骨成型蛋白2（BMP-2）ELISA試劑盒 Mouse Bone morphogenetic protein 2,BMP-2 ELISA試劑盒
小鼠骨成型蛋白4（BMP-4）ELISA試劑盒 Mouse Bone morphogenetic protein 4,BMP-4 ELISA試劑盒
小鼠骨成型蛋白受體1A（BMPR-1A）ELISA試劑盒 Mouse Bone morphogenetic protein receptor 1A,BMPR-1A ELISA試劑盒
小鼠堿性磷酸酶（ALP）ELISA試劑盒  Mouse alkaline phosphatase,ALP ELISA試劑盒
小鼠血管生成素4（ANG-4）ELISA試劑盒  Mouse Angiopoietin 4,ANG-4 ELISA試劑盒
小鼠骨成型蛋白受體Ⅱ（BMPR-Ⅱ）ELISA試劑盒 Mouse Bone morphogenetic protein receptor Ⅱ,BMPR-Ⅱ ELISA試劑盒
小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類（MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ）ELISA試劑盒 Mouse major histocompatibility complex-Ⅲ,MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ ELISA試劑盒
小鼠E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白（E-Cad）ELISA試劑盒 Mouse E-Cadherin,E-Cad ELISA試劑盒
小鼠CD30分子（CD30）ELISA試劑盒 Mouse Cluster of differentiation 30,CD30 ELISA試劑盒
小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類（MHC-Ⅱ/H-2ⅡELISA試劑盒  Mouse major histocompatibility complex-Ⅱ,MHC-Ⅱ/H-2Ⅱ ELISA試劑盒
小鼠可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體（sEPCR）ELISA試劑盒 Mouse soluble endothelial protein C receptor,sEPCR ELISA試劑盒
小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子（ECF）ELISA試劑盒 Mouse eosinophil chemotactic factor,ECF ELISA試劑盒
小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin 1（Eotaxin 1/CCL11）ELISA試劑盒 Mouse Eotaxin 1 ELISA試劑盒
小鼠紅細(xì)胞生成素（EPO）ELISA試劑盒 Mouse Erythropoietin,EPO ELISA試劑盒
小鼠E選擇素（E-Selectin/CD62E）ELISA試劑盒  Mouse E-Selectin ELISA試劑盒