濾紙酶可見分光光度法檢測試劑盒實驗方法學(xué):
一、肝素的配制:產(chǎn)品僅用于科研
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
測定意義:
纖維素酶是由微生物產(chǎn)生的多組分的酶系,能水解纖維素β-1,4葡萄糖苷鍵生成葡萄糖,濾紙酶是其中的一個組分,研究濾紙酶活力對纖維素酶的研究具有非常重要的意義。
測定原理
濾紙酶水解濾紙產(chǎn)生的還原糖能與3,5-二硝基水楊酸生成紅棕色氨基化合物,在540nm處有光吸收,在一定范圍內(nèi)反應(yīng)液顏色深淺與還原糖的量成正比,可測定計算得濾紙酶的活力。
自備實驗用品及儀器
天平、研缽、低溫離心機、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。。