兔抗人堿性成纖維細胞生長因子多克隆抗體操作步驟:
1、 十二烷基硫#鈉SDS溶液:0%(w/v)0.gSDS,mlH2O去離子水配制,室溫保存。
2、 分離膠緩沖液:.5mmol/L Tris-HCl (pH8.8):8.5gTris和48mlmol/L HCl 混合,加水稀釋到,b-FGFWestern
3、 濃縮膠緩沖液:0.5mmol/L Tris-HCl (pH6.8):6.05gTris溶于40mlH2O中,用約48ml mol/L HCl調(diào)至pH6.8加水稀釋到00ml終體積。過濾后40C保存。這兩種緩沖液必須使用Tris堿制備,再用HCL調(diào)節(jié)PH值,而不用 Tris.CL。
4、 TEMED原溶液N,N,N’N’四甲基乙二胺催化過硫#銨形成自由基而加速兩種丙稀酰胺的聚合。
5、 SDS- PAGE加樣緩沖液:pH6.8 0.5mol/L Tris緩沖液8ml,甘油6.4ml,0%SDS 2.8ml,巰基乙醇3.2ml,0.05%溴酚藍.6ml,H2O 32ml混勻備用。按:或:2比例與蛋白質(zhì)樣品混合,在沸水終煮3min混勻后再上樣,一般為20-25ul,總蛋白量00μg。
6、 Tris-甘氨#電泳緩沖液:30.3gTris,88g甘氨#,0gSDS,用蒸餾水溶解至000ml,得0.25mol/L Tris-.92mol/L甘氨#電極緩沖液。臨用前稀釋0倍。
7、 轉(zhuǎn)移緩沖液:配制L轉(zhuǎn)移緩沖液,需稱取2.9g甘氨#、5.8gTris堿、0.37g SDS,并加入200ml甲醇,加水至總量L。
8、 麗春紅染液儲存液:麗春紅S 2g 三#乙#30g 磺基水楊# 30g 加水至00ml 用時上述儲存液稀釋0倍即成麗春紅S使用液。使用后應予以廢棄。