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乙醛脫氫酶(ALDH)測(cè)定步驟

時(shí)間:2021/7/7閱讀:5912
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乙醛脫氫酶(ALDH)測(cè)定步驟:

、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至600nm,蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測(cè)定

()試劑四于37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)孵育5min。

(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入0μL樣本、200μL試劑四和40μL試劑五,混勻,記錄600nm處20s時(shí)吸光值A(chǔ)和min20s后的吸光值A(chǔ)2,計(jì)算ΔA=A-A2。

NOX 活力單位的計(jì)算

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

、血清(漿)NOX活力的計(jì)算:

單位的定義:每mL血清(漿)在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.0定義為一個(gè)酶活力單位。

NOX(U/mL)=ΔA×V反總÷V樣÷0.0÷T=2500×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NOX活力的計(jì)算:

()按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.0定義為一個(gè)酶活力單位。

NOX(U/mg prot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.0÷T=2500×ΔA÷Cpr

此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。

(2)按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.0定義為一個(gè)酶活力單位。

NOX(U/g鮮重)=ΔA×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷0.0÷T=505×ΔA÷W

(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.0定義為一個(gè)酶活力單位。

NOX(U/04cell)=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.0÷T=.0×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,0.25mL;V樣:加入樣本體積,0.0mL;V樣總:加入提取液體積,0.202mL;T:反應(yīng)時(shí)間,min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500萬。

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