ELISA試劑盒對牛乳中檢測的過程

ELISA試劑盒初步組裝試劑盒并對試劑盒的各組分的穩(wěn)定性進行了檢測和優(yōu)化，成功建立了能在6個月內維持穩(wěn)定的ELISA試劑盒，并以所組建的試劑盒對牛奶樣品中的添加藥物進行了測定。利用5C0雜交瘤細胞株的小鼠腹水單抗建立了檢測SM殘留的間接競爭ELISA方法。采用包被抗原稀釋度∶3200，腹水抗體的工作濃度∶.6×05，尺度曲線線性方程為y=.0522-0.3276x(0～000ng/ml)，半數(shù)按捺濃度為93.22ng/ml，檢測限約為5ng/ml。氨基糖苷類抗生素是一類應用廣泛的廣譜抗菌藥物，主要包括(SM)、(GM)、(KM)等，對奶牛乳房炎等有很好的療效，常用作獸醫(yī)臨床治療及飼料藥物添加劑。

　　對患乳房炎奶牛進行肌肉打針和乳房給藥治療，ELISA試劑盒采用本試劑盒測定牛奶中的殘留濃度，證明用藥后牛奶的廢棄期分別為至少2d和4.5d。分別采用CMO法、活化酯法、戊二醛法合成了的5種人工抗原，從免疫原性及不亂性等方面臨5種抗原進行比較，*選擇活化酯法合成的BSA-SM/b作為免疫抗原，通過雜交瘤技術獲得株能不亂分泌抗特異性單克隆抗體的雜交瘤細胞株5C0。通過實驗比較了5種樣品處理方法，選擇用Careez法處理并4倍稀釋后用于測定。為探索一種能夠快速有效的檢測牛奶中殘留的方法，本研究采用單克隆抗體技術和酶聯(lián)免疫吸附測定等技術，合成人工抗原，制備出抗單克隆抗體，建立了檢測牛奶中SM殘留的ELISA測定法，組建成快速檢測ELISA試劑盒并進行了優(yōu)化和實際應用。作為一種敏捷、快速、特異性強的方法，酶聯(lián)免疫吸附測定法正逐漸應用于藥物的殘留檢測，海內外已經建立了多種檢測牛奶中留的理化檢測方法，固然有些方法比較敏捷、，但因為方法復雜、耗時長、花費大、技術要求高等原因而不適合大批量樣品的篩選。制備的腹水效價為∶280000，蛋白濃度為26.2mg/ml，與其他抗菌藥物的交叉反應率均低于0.%。ELISA試劑盒尺度曲線的批內變異系數(shù)為.87%，均勻批間變異系數(shù)為8.07%。建立ELISA尺度曲線的線性方程為y=.806-0.4932x(線性范圍25～2500ng/ml)，其LOD為8.ng/ml，低于劃定的牛奶中zui低殘留*200ng/ml。然而不規(guī)范用藥會引起畜禽產品尤其是泌乳動物乳汁中的藥物殘留，對人類的健康構成潛伏危害。