國產(chǎn)ELISA試劑盒本試劑盒用于測(cè)定BALB/C小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中尿素氮(BUN)含量。
小鼠尿素氮（BUN） ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中BALB/C小鼠尿素氮(BUN)水平。用純化的BALB/C小鼠尿素氮(BUN)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入尿素氮(BUN)，再與HRP標(biāo)記的尿素氮(BUN)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的尿素氮(BUN)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中BALB/C小鼠尿素氮(BUN)濃度。
小鼠尿素氮（BUN） ELISA試劑盒標(biāo)本要求
．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
國產(chǎn)ELISA試劑盒操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
600pmol/L
5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
50μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
800pmol/L
4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
50μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
400pmol/L
3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
50μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
200pmol/L
2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
50μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
00pmol/L
號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
50μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品0μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
溫育：操作同3。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色0分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后5分鐘以內(nèi)進(jìn)行國產(chǎn)ELISA試劑盒。