大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體分離自腦皮層組織；大腦分左右兩個(gè)半球，大腦皮質(zhì)（灰質(zhì)）覆蓋著每個(gè)大腦半球的大部分，它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。少突膠質(zhì)細(xì)胞分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，在銀浸染標(biāo)本中，少突膠質(zhì)細(xì)胞比星狀膠質(zhì)細(xì)胞小，其突起也較小而少，呈珠狀，故被稱為少突膠質(zhì)細(xì)胞或寡突膠質(zhì)細(xì)胞。少突膠質(zhì)細(xì)胞（oligodendrocyte）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）的成髓鞘神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，其發(fā)育要經(jīng)歷少突膠質(zhì)細(xì)胞祖細(xì)胞、前少突膠質(zhì)細(xì)胞祖細(xì)胞、未成熟和成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞等階段。有學(xué)者將少突膠質(zhì)細(xì)胞按其發(fā)育程度和形態(tài)分為三型。但是，細(xì)胞發(fā)育是一個(gè)連續(xù)的過程，其形態(tài)、表達(dá)產(chǎn)物和功能的演變沒有嚴(yán)格的界限，因此，其分類是相對(duì)的。這三型分別為：Ⅰ型少突膠質(zhì)細(xì)胞又稱前O2A（pre-O2A progenitor cell）。細(xì)胞呈圓形，表面光滑，直徑約3μm，體外混合培養(yǎng)時(shí)成簇生長(zhǎng)在星形膠質(zhì)表面，具有很強(qiáng)的分裂增殖潛力，表達(dá)神經(jīng)節(jié)苷GM1、波形蛋白和多唾液酸—神經(jīng)粘附分子（polysialic acid-neural cell adhesion molecule，PSA-NCAM）等。Ⅱ型少突膠質(zhì)細(xì)胞胞體常有雙極或三極突起，極少數(shù)為單極突起，直徑約7μm，有一定的分裂增殖能力。體外培養(yǎng)時(shí)為雙潛能細(xì)胞，既可分化為少突膠質(zhì)細(xì)胞又可分化為Ⅱ型星形膠質(zhì)，故又稱為少突膠質(zhì)細(xì)胞-Ⅱ型星形膠質(zhì)祖細(xì)胞（oligodendrocyte-type-2 astrocyte progenitor cell，O2A）。O2A除表達(dá)GM1和波形蛋白外還表達(dá)神經(jīng)節(jié)苷GD3和GQ（淋巴雜交瘤株A2B5產(chǎn)生GQ的抗體），故常用A2B5抗體標(biāo)記O2A。Ⅲ型少突膠質(zhì)細(xì)胞不再具有分裂增殖能力，為分裂終期細(xì)胞。直徑約10μm。根據(jù)其形成髓鞘的能力，又分為不成熟的和成熟的兩類少突膠質(zhì)細(xì)胞。不成熟的OL胞體常伸出4～5條較粗大突起，表面還殘留有A2B5標(biāo)記物，同時(shí)也表達(dá)O1-O4抗原，無形成髓鞘的能力。成熟的少突膠質(zhì)細(xì)胞突起有如蜘蛛網(wǎng)，大量表達(dá)半乳糖腦苷脂（galactocerebro side，GC）、蛋白脂蛋白（proteio lipid protein，PLP）、髓鞘堿性蛋白（myelin basic protein，MBP）等，有對(duì)軸突髓鞘化的能力。體外培養(yǎng)的少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞（簡(jiǎn)稱少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞）包括前O2A和O2A和未成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞，前兩者具有增殖能力。
方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)采用yi蛋白酶消化、混合細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)缺失培養(yǎng)、搖床振蕩結(jié)合差速貼壁法并通過專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶
質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體經(jīng)A2B5免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

本公司所有產(chǎn)品僅供科學(xué)實(shí)驗(yàn)，不做其他科學(xué)實(shí)驗(yàn)外的使用！

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含B-27、PDGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次；

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 雙極、多極形

傳代特性 不傳代，不增殖，存活1-2周

消化液 0.25%yi蛋白酶

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

準(zhǔn)備工作

1. 實(shí)驗(yàn)器材準(zhǔn)備：準(zhǔn)備無菌的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、移液管、離心管、手術(shù)器械等，并進(jìn)行高壓滅菌或其他合適的消毒處理。

2. 試劑準(zhǔn)備：配制或購買合適的培養(yǎng)基、消化酶（如、膠原酶等）、胎牛血清、雙抗等試劑，確保其無菌且在有效期內(nèi)。

3. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或組織來源準(zhǔn)備：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，選擇合適的動(dòng)物并進(jìn)行相應(yīng)的麻醉或處死，獲取所需組織；或從已有的組織樣本庫中獲取組織。

取材與處理

1. 取材：在無菌條件下，迅速取出目標(biāo)組織，盡量減少對(duì)組織的損傷，并去除多余的脂肪、結(jié)締組織等非目的組織。

2. 清洗：將取出的組織用預(yù)冷的無菌PBS沖洗數(shù)次，以去除血液和雜質(zhì)。

3. 剪切：將組織剪成約1 - 2mm3的小塊，以便后續(xù)消化。

細(xì)胞分離

1. 消化：將剪碎的組織塊放入含有適量消化酶的離心管中，在37℃恒溫?fù)u床或培養(yǎng)箱中消化一段時(shí)間。期間可輕輕搖晃離心管，使消化更均勻。

2. 終止消化：當(dāng)組織塊大部分被消化成單細(xì)胞懸液或小細(xì)胞團(tuán)時(shí)，加入含血清的培養(yǎng)基終止消化。

3. 過濾與離心：用細(xì)胞篩過濾細(xì)胞懸液，去除未消化的組織碎片，然后將濾液以適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)速離心，收集細(xì)胞沉淀。

細(xì)胞觀察與檢測(cè)

1. 日常觀察：每天用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài)、密度等，記錄細(xì)胞的變化情況，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞污染或異常，及時(shí)采取相應(yīng)措施。
2. 細(xì)胞計(jì)數(shù)與活力檢測(cè)：在需要時(shí)，可采用臺(tái)盼藍(lán)染色等方法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和活力檢測(cè)，以了解細(xì)胞的生長(zhǎng)情況和健康狀態(tài)。

一、取材與分離

1. 快速操作

- 組織取材后需立即處理，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于室溫或非營(yíng)養(yǎng)環(huán)境。

- 使用無菌 PBS 或生理鹽水沖洗組織，去除血液、雜質(zhì)。

2. 消化酶選擇

- 根據(jù)組織類型選擇消化酶，避免過度消化導(dǎo)致細(xì)胞損傷。

- 消化時(shí)間需嚴(yán)格控制（通常 10-30 分鐘），可通過顯微鏡觀察細(xì)胞解離狀態(tài)。

二、培養(yǎng)條件優(yōu)化

1. 培養(yǎng)基選擇

- 使用含血清或特定生長(zhǎng)因子的培養(yǎng)基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細(xì)胞需添加胰島素、EGF 等。

- 避免頻繁更換培養(yǎng)基品牌或批次，減少細(xì)胞適應(yīng)壓力。

2. 貼壁與傳代

- 原代細(xì)胞貼壁能力較弱，可能需要包被培養(yǎng)皿（如膠原蛋白、多聚賴氨酸）。

- 傳代時(shí)密度建議控制在 70%-80%，過度匯合會(huì)導(dǎo)致接觸抑制和分化。

三、污染控制

1. 無菌操作

- 全程在超凈臺(tái)操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。

- 培養(yǎng)基中可添加雙抗，但長(zhǎng)期使用可能影響細(xì)胞活性。

2. 支原體檢測(cè)

- 定期檢測(cè)支原體污染（如 PCR 法），污染后需及時(shí)丟棄細(xì)胞。

四、狀態(tài)監(jiān)控

1. 日常觀察

- 每天檢查細(xì)胞形態(tài)、密度及培養(yǎng)基顏色，及時(shí)更換培養(yǎng)基（通常每 2-3 天換液一次）。

- 異常形態(tài)（如細(xì)胞變圓、碎片增多）可能提示污染或營(yíng)養(yǎng)不足。

2. 傳代與凍存

- 原代細(xì)胞分裂次數(shù)有限（一般 5-10 代），需及時(shí)凍存早期代次細(xì)胞。

- 凍存液建議使用 DMSO+血清（或?qū)Ｓ脙龃媾囵B(yǎng)基），梯度降溫后液氮保存。