大鼠淋巴結(jié)淋巴分離自淋巴結(jié)；淋巴結(jié)是哺乳類的周圍淋巴器官，由淋巴細胞集合而成。呈豆形，位于淋巴管行進途中，是產(chǎn)生免疫應答的重要器官之一。淋巴結(jié)表面包有被膜，被膜的結(jié)締組織伸入淋巴結(jié)內(nèi)形成小梁，構(gòu)成淋巴結(jié)的支架。被膜下為皮質(zhì)區(qū)，淋巴結(jié)的中心及門部為髓質(zhì)區(qū)。皮質(zhì)區(qū)有淋巴小結(jié)、彌散淋巴組織和皮質(zhì)淋巴竇（簡稱皮竇），髓質(zhì)包括由致密淋巴組織構(gòu)成的髓索和髓質(zhì)淋巴竇（簡稱髓竇）。淋巴竇的竇腔內(nèi)有許多淋巴細胞和巨噬細胞，從輸入淋巴管流來的淋巴液入皮竇再流向髓竇，最后經(jīng)輸出淋巴管離開淋巴結(jié)。淋巴結(jié)的主要功能是濾過淋巴液，產(chǎn)生淋巴細胞和漿細胞，參與機體的免疫反應。淋巴結(jié)腫大或疼痛常表示其屬區(qū)范圍內(nèi)的器官有炎癥或其他病變。主要功能是濾過淋巴液，產(chǎn)生淋巴細胞和漿細胞，參與機體的免疫反應；當局部感染時，細菌、病毒或癌細胞等可沿淋巴管侵入，引起局部淋巴結(jié)腫大。如該淋巴結(jié)不能阻止和消滅它們，則病變可沿淋巴管的流注方向擴散和轉(zhuǎn)移。淋巴結(jié)淋巴細胞是白細胞的一種，由次級淋巴器官淋巴結(jié)產(chǎn)生，是機體免疫應答功能的重要細胞成分；細胞為圓形細胞核，細胞質(zhì)少。成熟淋巴細胞需依賴抗原刺激而分化增殖，繼而發(fā)揮其免疫功能。
方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠淋巴結(jié)淋巴采用分離淋巴結(jié)組織、研磨獲取單細胞懸液后通過密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為1×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的大鼠淋巴結(jié)淋巴經(jīng)過檢測，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

本公司所有產(chǎn)品僅供科學實驗，不做其他科學實驗外的使用！

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 懸浮

細胞形態(tài) 圓形

傳代特性 不增殖；不傳代

消化液 0.25%yi蛋白酶

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

準備工作

1. 實驗器材準備：準備無菌的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、移液管、離心管、手術器械等，并進行高壓滅菌或其他合適的消毒處理。

2. 試劑準備：配制或購買合適的培養(yǎng)基、消化酶（如、膠原酶等）、胎牛血清、雙抗等試劑，確保其無菌且在有效期內(nèi)。

3. 實驗動物或組織來源準備：根據(jù)實驗需求，選擇合適的動物并進行相應的麻醉或處死，獲取所需組織；或從已有的組織樣本庫中獲取組織。

取材與處理

1. 取材：在無菌條件下，迅速取出目標組織，盡量減少對組織的損傷，并去除多余的脂肪、結(jié)締組織等非目的組織。

2. 清洗：將取出的組織用預冷的無菌PBS沖洗數(shù)次，以去除血液和雜質(zhì)。

3. 剪切：將組織剪成約1 - 2mm3的小塊，以便后續(xù)消化。

細胞分離

1. 消化：將剪碎的組織塊放入含有適量消化酶的離心管中，在37℃恒溫搖床或培養(yǎng)箱中消化一段時間。期間可輕輕搖晃離心管，使消化更均勻。

2. 終止消化：當組織塊大部分被消化成單細胞懸液或小細胞團時，加入含血清的培養(yǎng)基終止消化。

3. 過濾與離心：用細胞篩過濾細胞懸液，去除未消化的組織碎片，然后將濾液以適當?shù)霓D(zhuǎn)速離心，收集細胞沉淀。

細胞觀察與檢測

1. 日常觀察：每天用倒置顯微鏡觀察細胞的形態(tài)、生長狀態(tài)、密度等，記錄細胞的變化情況，如發(fā)現(xiàn)細胞污染或異常，及時采取相應措施。
2. 細胞計數(shù)與活力檢測：在需要時，可采用臺盼藍染色等方法對細胞進行計數(shù)和活力檢測，以了解細胞的生長情況和健康狀態(tài)。

一、取材與分離

1. 快速操作

- 組織取材后需立即處理，避免長時間暴露于室溫或非營養(yǎng)環(huán)境。

- 使用無菌 PBS 或生理鹽水沖洗組織，去除血液、雜質(zhì)。

2. 消化酶選擇

- 根據(jù)組織類型選擇消化酶，避免過度消化導致細胞損傷。

- 消化時間需嚴格控制（通常 10-30 分鐘），可通過顯微鏡觀察細胞解離狀態(tài)。

二、培養(yǎng)條件優(yōu)化

1. 培養(yǎng)基選擇

- 使用含血清或特定生長因子的培養(yǎng)基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細胞需添加胰島素、EGF 等。

- 避免頻繁更換培養(yǎng)基品牌或批次，減少細胞適應壓力。

2. 貼壁與傳代

- 原代細胞貼壁能力較弱，可能需要包被培養(yǎng)皿（如膠原蛋白、多聚賴氨酸）。

- 傳代時密度建議控制在 70%-80%，過度匯合會導致接觸抑制和分化。

三、污染控制

1. 無菌操作

- 全程在超凈臺操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。

- 培養(yǎng)基中可添加雙抗，但長期使用可能影響細胞活性。

2. 支原體檢測

- 定期檢測支原體污染（如 PCR 法），污染后需及時丟棄細胞。

四、狀態(tài)監(jiān)控

1. 日常觀察

- 每天檢查細胞形態(tài)、密度及培養(yǎng)基顏色，及時更換培養(yǎng)基（通常每 2-3 天換液一次）。

- 異常形態(tài)（如細胞變圓、碎片增多）可能提示污染或營養(yǎng)不足。

2. 傳代與凍存

- 原代細胞分裂次數(shù)有限（一般 5-10 代），需及時凍存早期代次細胞。

- 凍存液建議使用 DMSO+血清（或?qū)Ｓ脙龃媾囵B(yǎng)基），梯度降溫后液氮保存。