上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司作者
DNA改組(DNA shuffling)是目前zui方便、有效的一種分子水平的體外定向進(jìn)化技術(shù),該技術(shù)同傾向錯(cuò)誤PCR (Error-prone PCR) 相結(jié)合,通過(guò)對(duì)單基因或相關(guān)基因家族的靶序列進(jìn)行多輪隨機(jī)誘變、重組和高通量的篩選,可以有效富集正突變,去除負(fù)突變,提高突變文庫(kù)的豐度,創(chuàng)造新基因和獲得期望功能的蛋白質(zhì)。來(lái)自湖南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院微生物分子生物學(xué)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的研究人員對(duì)這一重要技術(shù)進(jìn)行了總結(jié)和展望,并提出了DNA改組的創(chuàng)新,發(fā)展和改組過(guò)程中應(yīng)當(dāng)注意的問(wèn)題。
DNA改組由由美國(guó)的Stemmer于1994年首先提出,經(jīng)后人的不斷創(chuàng)新和改進(jìn),現(xiàn)已發(fā)展成為比較完善的技術(shù)體系。作為一種高通量的突變和篩選技術(shù),不僅可以實(shí)現(xiàn)基因序列的點(diǎn)突變,還可以實(shí)現(xiàn)其它突變技術(shù)不能實(shí)現(xiàn)的基因片段插入、缺失、倒轉(zhuǎn)和整合等,而且可以反復(fù)改組,實(shí)現(xiàn)突變的優(yōu)勢(shì)積累效應(yīng)。
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