hbzhan內容導讀：分光光度法是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內光的吸收度，對該物質進行定性和定量分析。常用的波長范圍為：（1）200～400nm的紫外光區(qū)（2）400～760nm的可見光區(qū),（3）2.5～25μm（按波數計為4000cm<-1>～400cm<-1>）的紅外光區(qū)。
　　
　　所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計（或比色計）、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準確度，所有儀器應按照國家計量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定，定期進行校正檢定。
　　
　　分光光度計是精密光學儀器，正確安裝、使用和保養(yǎng)對保持儀器良好的性能和保證測試的準確度有重要作用。
　　
　?。?）儀器工作環(huán)境的要求
　　
　　分光光度計對工作環(huán)境的要求如下：
　　
　　①儀器應安放在干燥的房間內，使用溫度為5～35℃．相對濕度不超過85％。
　　
　?、趦x器應放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上，且避免強烈的振動或持續(xù)的振動。
　　
　　③室內照明不宜太強，且應避免直射日光的照射。
　　
　?、茈娚炔灰酥苯酉騼x器吹風，以防止光源燈因發(fā)光不穩(wěn)定而影響儀器的正常使用。
　　
　?、荼M量遠離高強度的磁場、電場及發(fā)生高頻波的電器設備。
　　
　　⑥供給儀器的電源電壓為AC220V±22V，頻率為50Hz±1Hz，并必須裝有良好的接地線。推薦使用功率為1000w以上的電子交流穩(wěn)壓器或交流恒壓穩(wěn)壓器，以加強儀器的抗干擾性能。
　　
　?、弑苊庠谟辛蚧瘹涞雀g性氣體的場所使用。
　　
　?。?）儀器的日常維護和保養(yǎng)
　　
　?、俟庠础９庠吹膲勖邢?，為了延長光源使用壽命，在不使用儀器時不要開光源燈，應盡量減少開關次數。在短時問的工作間隔內可以不關燈。剛關閉的光源燈不能立即重新開啟。
　　
　　儀器連續(xù)使用時間不應超過3h。若需長時間使用，間歇30min。
　　
　　如果光源燈亮度明顯減弱或不穩(wěn)定，應及時更換新燈。更換后要調節(jié)好燈絲位置，不要用手直接接觸窗口或燈泡，避免油污沾附。若不小心接觸過，要用無水乙醇擦拭。
　　
　?、趩紊?。單色器是儀器的核心部分，裝在密封盒內，不能拆開。選擇波長應平衡地轉動，不可用力過猛。為防止色散元件受潮生霉，必須定期更換單色器盒干燥劑（硅膠）。若發(fā)現干燥劑變色，應立即更換。
　　
　?、畚粘?。必須正確使用吸收池，應特別注意保護吸收池的兩個光學面。
　　
　?、軝z測器。光電轉換元件不能長時間曝光，且應避免強光照射或受潮積塵。
　　
　?、莓攦x器停止工作時，必須切斷電源。
　　
　?、逓榱吮苊鈨x器積灰和沾污，在停止工作時，應蓋上防塵罩。
　　
　　⑦儀器若暫時不用要定期通電，每次不少于20～30min，以保持整機呈干燥狀態(tài)，并且維持電子元器件的性能。
　　
　　紫外—可見分光光度計類型
　　
　　紫外一可見分光光度計按使用波長范圍可分為：可見分光光度計和紫外一可見分光光度汁兩類。前者使用的波長范圍為400～780nm；后者使用的波長范圍為200～1000nm。
　　
　　按光路紫外一可見分光光度計可分為單光束式及雙光束式兩類；按測量時提供的波長數又可分為單波長分光光度計和雙波長分光光度計兩類。
　　
　　所謂單光束是指從光源中發(fā)出的光，經過單色器等一系列光學元件及吸收池后，zui后照在檢測器上時始終為一束光。常用的單光束紫外一可見分光光度計有751G型、752型、754
　　
　　型、756MC型等。常用的單光束可見分光光度計有721型、722型、723型、724型等。
　　
　　單光束分光光度計的特點是結構簡單、價格低，主要適于作定量分析。其不足之處是測定結果受光源強度波動的影響較大，因而給定量分析結果帶來較大誤差。
　　
　　雙光束分光光度計是指從光源中發(fā)出的光經過單色器后被一個旋轉的扇形反射鏡（即切光器）分為強度相等的兩束光，分別通過參比溶液和樣品溶液。利用另一個與前一個切光器同步的切光器，使兩束光在不同時間交替地照在同一個檢測器上，通過一個同步信號發(fā)生器對來自兩個光束的信號加以比較，并將兩信號的比值經對數變換后轉換為相應的吸光度值。
　　
　　常用的雙光束紫外一可見分光光度計有710型、730型、760MC型、760CRT型、日本島津UV一210型等。這類儀器的特點是：能連續(xù)改變波長，自動地比較樣品及參比溶液的透光強度，自動消除光源強度變化所引起的誤差。對于必須在較寬的波長范圍內獲得復雜的吸收光譜曲線的分析，此類儀器極為合適。
　　
　　雙波長分光光度計與單波長分光光度計的主要區(qū)別在于采用雙單色器，以同時得到兩束波長不同的單色光。光源發(fā)出的光分成兩束，分別經兩個可以自由轉動的光柵單色器，得到兩束具有不同波長A1和A2的單色光。借切光器，使兩束光以一定的時間問隔交替照射到裝有試液的吸收池上，由檢測器顯示出試液在波長λ1和λ2的透射比差值△r或吸光度差值△A，則
　　
　　△A＝Aλ1－Aλ2＝﹙Eλ1－Eλ2）bc
　　
　　由式可知，△A與吸光物質c成正比。這就是雙波長分光光度進行定量分析的理論根據。
　　
　　常用的雙光束分光光度計有國產wFZ800S、日本島津UV一300、UV一365等。
　　
　　這類儀器的特點是：不用參比溶液，只用一個待測溶液，因此可以消除背景吸收干擾，包括待測溶液與參比溶液組成的不同及吸收液厚度的差異的影響，提高了測量的準確度。它特別適合混合物和渾濁樣品的定量分析，可進行導數光譜分析等。其不足之處是價格昂貴。