血清學(xué)反應(yīng)是指：相應(yīng)的抗原與抗體在體外一定條件下作用，可出現(xiàn)肉眼可見的沉淀、凝集現(xiàn)象。在食品微生物檢驗中，常用血清學(xué)反應(yīng)來鑒定分離到的細菌，以zui終確認檢測結(jié)果。

血清學(xué)-反應(yīng)的一般特點

1）抗原體的結(jié)合具有特異性，當有共同抗原體存在時，會出現(xiàn)交叉反應(yīng)。

2）抗原體的結(jié)合是分子表面的結(jié)合，這種結(jié)合雖相當穩(wěn)定，但是可逆的。

3）抗原體的結(jié)合是按一定比例進行的，只有比例適當時，才能出現(xiàn)可見反應(yīng)。

4）反應(yīng)大體分為兩個階段進行，但其間無嚴格界限。*階段為抗原體特異性結(jié)合階段，反應(yīng)速度很快，只需幾秒至幾分鐘反應(yīng)即可完畢，但不出現(xiàn)肉眼可見現(xiàn)象。第二階段為抗原體反應(yīng)的可見階段，表現(xiàn)為凝集、沉淀、補體結(jié)合反應(yīng)等。反應(yīng)速度慢，需幾分、幾十分以至更長時間。而且，在第二階段反應(yīng)中，電解質(zhì)、PH、溫度等環(huán)境因素的變化，都直接影響反應(yīng)的結(jié)果。

習(xí)慣上將經(jīng)典的反應(yīng)分三種類別：凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)和補體結(jié)合反應(yīng)。

１、凝集反應(yīng)

顆粒性抗原（細菌、紅細胞等）與相應(yīng)抗體結(jié)合，在電解質(zhì)參與下所形成的肉眼可見的凝集現(xiàn)象，稱為凝集反應(yīng)（Agglutinationreaction）。其中的抗原稱為凝集原，抗體稱為凝集素。在該反應(yīng)中，因為單位體積抗體量大，做定量實驗時，應(yīng)稀釋抗體。

１）直接凝集反應(yīng)

顆粒性抗原與相應(yīng)抗體直接結(jié)合所出現(xiàn)的反應(yīng)，稱為直接凝集反應(yīng)（Directagglutionreaction）。

a.玻片凝集法。是一種常規(guī)的定性試驗方法。原理是用已知抗體來檢測未知抗原。常用于鑒定菌種、血型。如將含有痢疾桿菌抗體的血清與待檢菌液各一滴，在玻片上混勻，數(shù)分種后若出現(xiàn)肉眼可見的凝集塊，即陽性反應(yīng)，證明該菌是痢疾桿菌。此法快速、簡便，但不能進行定量測定。

b.試管凝集法。是一種定量試驗方法。多用已知抗原來檢測血清中有無相應(yīng)抗體及其含量。常用于協(xié)助診斷某些傳染病及進行流行病學(xué)調(diào)查。如肥達氏反應(yīng)就是診斷傷寒、付傷寒的試管凝集試驗。因為要測定抗體的含量，故將待檢查的血清用等滲鹽水倍比稀釋成不同濃度，然后加入等量抗原，37℃或56℃，2~4小時觀察，血清zui高稀釋度仍有明顯凝集現(xiàn)象的，為該抗血清的凝集效價。

２）間接凝集反應(yīng)

　　將可溶性抗原（抗體）先吸附在一種與免疫無關(guān)的，顆粒狀微球表面，然后與相應(yīng)抗體（抗原）作用，在有電解質(zhì)存在的條件下，即可發(fā)生凝集，稱為間接凝集反應(yīng)（Indirect
agglutination）。由于載體增大了可溶性抗原的反應(yīng)面積。當載體上有少量抗原與抗體結(jié)合。就出現(xiàn)肉眼可見的反應(yīng)，敏感性很高。

２、沉淀反應(yīng)

可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，在有適量電解質(zhì)存在下，經(jīng)過一定時間，形成肉眼可見的沉淀物，稱為沉淀反應(yīng)（Precipitation）。反應(yīng)中的抗原稱為沉淀原，抗體為沉淀素。由于在單位體積內(nèi)抗原量大，為了不使抗原過剩，故應(yīng)稀釋抗原，并以抗原的稀釋度作為沉淀反應(yīng)的效價。

１）環(huán)狀沉淀反應(yīng)：是一種定性試驗方法，可用已知抗體檢測未知抗原。將已知抗體注入特制小試管中，然后沿管壁徐徐加入等量抗原，如抗原與抗體對應(yīng)，則在兩液界面出現(xiàn)白色的沉淀圓環(huán)。
２）絮狀沉淀反應(yīng)：將已知抗原與抗體在試管（如凹玻片）內(nèi)混勻，如抗原抗體對應(yīng)，而又二者比例適當時，會出現(xiàn)肉眼可見的絮狀沉淀，此為陽性反應(yīng)。
３）瓊脂擴散試驗：利用可溶性抗原抗體在半固體瓊脂內(nèi)擴散，若抗原抗體對應(yīng)，且二者比例合適，在其擴散的某一部分就會出現(xiàn)白色的沉淀線。每對抗原抗體可形成一條沉淀線。有幾對抗原抗體，就可分別形成幾條沉淀線。瓊脂擴散可分為單向擴散和雙向擴散兩種類型。單向擴散是一種定量試驗。可用于免疫蛋白含量的測定。而雙向擴散多用于定性試驗。由于方法簡便易行，常用于測定分析和鑒定復(fù)雜的抗原成分。

３、補體結(jié)合反應(yīng)

補體結(jié)合反應(yīng)（Complementfixation
reaction）是在補體參與下，以綿羊紅細胞和溶血素作為指示系統(tǒng)的抗原抗體反應(yīng)。補體無特異性，能與任何一組抗原抗體復(fù)合物結(jié)合而引起反應(yīng)。如果補體與綿羊紅細胞、溶血素的復(fù)合物結(jié)合，就會出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，如果與細菌及相應(yīng)抗體復(fù)合物結(jié)合，就會出現(xiàn)溶菌現(xiàn)象。因此，整個試驗需要有補體、待檢系統(tǒng)（已知抗體或抗原、未知抗原或抗體）及指示系統(tǒng)（綿羊細胞和溶血素）五種成份參加。其試驗原理是補體不單獨和抗原或抗體結(jié)合。如果出現(xiàn)溶菌，是補體與待檢系統(tǒng)結(jié)合的結(jié)果，說明抗原抗體是相對應(yīng)的，如果出現(xiàn)溶血，說明抗原抗體不相對應(yīng)。此反應(yīng)操作復(fù)雜，敏感性高，特異性強，能測出少量抗原和抗體，所以應(yīng)用范圍較廣。

-方法--血凝和血凝抑制試驗

一些病毒或病毒的血凝素能選擇性地使某種或某幾種動物的紅細胞發(fā)生凝集，這種凝集紅細胞的現(xiàn)象稱為血凝（Hemagglutination，HA）。正粘病毒和副粘病毒是zui主要的紅細胞凝集性病毒；其他病毒包括披膜病毒、細小病毒、某些腸道病毒和腺病毒等也有凝集紅細胞的作用，但常要求比較嚴格的反應(yīng)條件，例如一定的pH范圍等。各種病毒的血凝素性質(zhì)不盡相同。某些病毒可在很廣的pH條件下呈現(xiàn)血凝作用，某些病毒則只在很窄的pH范圍內(nèi)才能凝集紅細胞。某些病毒的血凝作用具有溫度依賴性，也就是只在一定溫度范圍內(nèi)才出現(xiàn)血凝現(xiàn)象；但另一些病毒卻可在4℃、室溫和37℃呈現(xiàn)同樣的血凝作用。病毒凝集的紅細胞種類，也隨病毒種類而不同，例如某些病毒主要對人和禽的紅細胞呈現(xiàn)凝集作用，另一些病毒則可凝集豚鼠或大鼠等的紅細胞。

當病毒的懸液中先加入特異性抗體，且這種抗體的量足以封閉病毒顆?；蚱溲貢r，則紅細胞表面的受體就不能與病毒顆粒或其血凝素直接接觸，這時紅細胞的凝集現(xiàn)象就被抑制，稱為紅細胞凝集抑制（HemagglutinationInhibition，HI），也稱為血凝抑制反應(yīng)。血凝的原理因病毒而有所不同，如痘病毒對雞紅細胞發(fā)生凝集作用并非是病毒的本身，而是痘病毒的產(chǎn)物類脂蛋白的作用。而流感病毒的血凝作用是病毒囊膜上的血凝素與紅細胞表面的受體糖蛋白相互吸附而發(fā)生的。病毒的血凝現(xiàn)象大致可以分為可逆轉(zhuǎn)型、不可逆轉(zhuǎn)性、凝集條件嚴格型三類。
血凝和血凝抑制試驗有常量法和微量法兩種，目前國內(nèi)外廣泛使用的都是微量法，各要素用量均為25ul，微量法省時、省料、。以下簡要介紹本次試驗的主要內(nèi)容，詳細內(nèi)容參見各國標。
各實驗室所采用的HA和HI試驗程序不同，下面的例子是應(yīng)用V型微量板進行的試驗，兩種方法反應(yīng)總體積都為75ul，本試驗所用試劑為如下：
1．生理鹽水：用蒸餾水或去離子水配制成0.85％NaCl溶液，高
壓滅菌備用。
2．紅細胞懸液：采雞血液，加于倍量的紅細胞保存液-阿氏液中，置4℃普通冰箱保存，可用一個月。使用前，取紅細胞懸液1份，用5～10倍量的生理鹽水洗滌3次，直至上清無色透明。取沉淀紅細胞，加生理鹽水制備成1％紅細胞懸液。
3．病毒液：包括接種病料后收獲的雞胚羊水、尿囊液或感染小鼠的肺乳劑，經(jīng)3000轉(zhuǎn)離心沉淀15分鐘，除去較大顆粒后應(yīng)用。血凝抑制試驗用的血凝素抗原，系用病毒接種雞胚后收獲的雞胚尿囊液和羊水，以3000轉(zhuǎn)離心20分鐘，吸取上清液，加入3倍量的滅菌生理鹽水，并加入1：10000硫柳汞防腐，保存于4℃冰箱備用。
4．特異性抗血清：用作陽性對照。一般用雞制備。取血凝效價在1：320倍以上的雞胚尿囊液，注射壯齡雞的腹腔內(nèi)，每次10毫升，共3次，每次間隔1周。zui后一次注射后2周放血，分離血清，置-20℃以下凍存。血凝抑制效價可達1：640倍以上。另一法是將尿囊液靜脈或腹腔注射壯齡公雞，每次2毫升，間隔1周，如上法注射4～5次，血凝抑制效價有時可高達1：5000倍以上。按上法給壯齡公雞靜脈或腹腔注射1次尿囊液，7天后采血，也可獲得血凝抑制效價有時可達1：160倍的抗血清。
5．8單位或4單位抗原的配制：以能引起紅細胞100％凝集的病毒zui高稀釋度作為終點，即1個HA單位，終點滴度除以8即為含8HA單位的抗原。例如，如果血凝終點滴度為1：256，則8個血凝單位的稀釋度應(yīng)是1:32（256除以8），此例中將1ml抗原加入31ml生理鹽水即為8HA單位抗原。取8HA單位的抗原加入等量生理鹽水即為4HA單位抗原。
血凝素效價測定：將待檢病毒液用生理鹽水作1：5稀釋，在大孔塑料滴定板或小試管中進行倍比稀釋，直至1：2560，每孔（管）0.25毫升，zui后1孔只加生理鹽水作為對照。隨即向各孔內(nèi)加入0.25毫升的1％雞紅細胞懸液，充分混勻，于室溫放置45分鐘后判定結(jié)果。紅細胞凝集程度以＋＋＋＋、＋＋＋、＋＋、＋和－表示。zui后1孔（管）的紅細胞應(yīng)無凝集現(xiàn)象。
紅細胞呈細砂粒狀均勻鋪于孔底者為＋＋＋＋，即100％凝集；紅細胞均勻鋪于孔底，但邊緣不整而稍向孔底集中者為＋＋＋，即75％凝集；紅細胞于孔底形成一個環(huán)狀，四周有小凝集塊者為＋＋，即50％凝集；紅細胞于孔底形成圓團，但邊緣不夠光滑，四周稍有凝集塊者為＋，即25％凝集；紅細胞于孔底形成圓團，邊緣光滑整齊者為-，即無凝集。
血凝素效價以＋＋為終點，即以能夠使50％紅細胞凝集的血凝素的zui高稀釋度作為該血凝素的血凝效價。
血凝（HA）試驗：在微量血凝板的1～12孔均加入25ul生理鹽水。用微量移液器吸取25ul抗原加入第1孔，混勻。從第1孔吸取25ul抗原液加入第2孔，混勻后吸取25ul加入第3孔，如此進行倍比稀釋至第11孔，從第11孔吸取25ul棄之，第12孔作為生理鹽水對照。每孔再加入25ul生理鹽水。之后每孔均加入25ul1％雞紅細胞懸液，在微量振蕩器上振蕩1min，使其混合均勻；在室溫（20℃～25℃）下作用40min后觀察結(jié)果。紅細胞凝集呈薄膜狀，均勻地覆蓋孔底，強凝集時凝集塊皺縮呈團狀或邊緣呈鋸齒狀，即100％的紅細胞凝集；紅細胞凝集呈薄層，但是面積較小，孔底中央有紅細胞沉積呈小圓點狀，即50％的紅細胞凝集；紅細胞全部沉于孔底中心呈小圓點狀，周圍光滑，無分散的紅細胞，即無凝集現(xiàn)象。能使紅細胞100％凝集的病毒zui高稀釋度作為該病毒的血凝價。
血凝抑制（HI）試驗：在微量反應(yīng)板的第1～11孔各加入25ul生理鹽水，第12孔加入50ul生理鹽水。吸取25ul血清加入第1孔內(nèi)，充分混勻后吸25ul于第2孔，依次對倍釋至第10孔，從第10孔吸取25ul棄去。1孔～11孔均加入含4HAU混勻的病毒抗原液25ul，室溫（約20℃）靜置至少30min。每孔加入25ul1％的雞紅細胞懸液混勻，輕輕混勻，靜置約40min（室溫約20℃），若環(huán)境溫度太高可置4℃條件下進行，對照紅細胞將呈顯鈕扣狀沉于孔底。以*抑制4個HAU抗原的血清zui高稀釋倍數(shù)作為HI滴度。只有陰性對照孔血清滴度不大于2㏒2，陽性對照孔血清誤差不超過1個滴度，試驗結(jié)果才有效。HI價小于或等于3㏒2判定HI試驗陰性；HI價等于4㏒2為可疑，需重復(fù)試驗；HI價大于或等于5㏒2為陽性。

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