好看日韩在线视频免费,日本不卡一区二区三区,三级a全过程在线观看,亚洲精品国产9999久久久久

技術(shù)中心

您現(xiàn)在的位置:環(huán)保在線 > 技術(shù)首頁(yè) > 技術(shù)交流

植原體菌種保藏技術(shù)

2010年08月15日 11:48:17人氣:1136來(lái)源:上海瑞齊生物科技有限公司

植原體是一類無(wú)細(xì)胞壁的原核微生物,能侵染包括農(nóng)作物、林木、花卉、雜草等植物,給農(nóng)、林業(yè)生產(chǎn)帶來(lái)巨大損失,近年來(lái),此類病害在某些重要植物處于蔓延和加重的趨勢(shì)。這類微生物尚不能在人工培養(yǎng)基上離體培養(yǎng),其細(xì)胞結(jié)構(gòu)、與寄主植物的互作等方面也有其明顯不同特點(diǎn),研究制定此類微生物的保藏技術(shù)規(guī)程,對(duì)于植原體菌種資源的規(guī)范和安全保藏、科學(xué)研究及合理利用具有重要意義

1   范圍本規(guī)程規(guī)定了植原體菌種保藏的基本原則、方法及技術(shù)要求。

本規(guī)程適用于各類植原體菌種的保藏。
2   術(shù)語(yǔ)與定義
2.1植原體  phytoplasma
指寄生于植物韌皮部和介體昆蟲(chóng)體內(nèi)的、具有三層單位膜結(jié)構(gòu)的無(wú)細(xì)胞壁的原核生物。一般引起植物葉片黃化和發(fā)育畸形等癥狀。
2.2植物組織培養(yǎng)  plant tissue culture
在無(wú)菌的條件下,將離體的植物器官和組織在人工控制的環(huán)境下培養(yǎng),使其再生形成完整植株的過(guò)程。培養(yǎng)植原體—植物共生體即是培養(yǎng)已感染植原體病菌的植物外植體。
 
3   原理
植原體菌種尚不能在離體人工培養(yǎng)基上培養(yǎng)。被感染的寄主植物攜帶植原體,因而通過(guò)對(duì)植物莖段的繁殖,即可達(dá)到對(duì)所攜帶植原體的繁殖和培養(yǎng)。植物組織培養(yǎng)和營(yíng)養(yǎng)繁殖,使植原體所受的選擇壓力較低,較低的溫度條件可大大減緩植物和所感染植原體的代謝活動(dòng),從而減少菌株突變,降低繁殖速度,有效保持菌種原有性狀。
4技術(shù)要求
4.1   保藏方法
用組織培養(yǎng)法保藏感染植原體的植物組織,于5-25 C溫度范圍內(nèi)保藏。
4.2植物組織培養(yǎng)基
選用適于植物組織正常生長(zhǎng)的培養(yǎng)基,不含四環(huán)素簇抗生素或其它對(duì)植原體生長(zhǎng)和繁殖有抑制作用的成分。
4.3   培養(yǎng)溫度和光照
培養(yǎng)溫度20-28 ℃為宜
光照強(qiáng)度在1000-3000  lx,光期為10-14h/d
4.4   保藏溫度和時(shí)間
常溫保藏(20-28 ℃),保藏時(shí)間1-3個(gè)月
低溫保藏(6-10 ℃),保藏時(shí)間6個(gè)月至1年。
注:保藏溫度低于4 ℃會(huì)凍傷植物組織材料而導(dǎo)致植原體死亡。
4.5   保藏期檢測(cè)
定期檢查保藏菌種的房間、冷庫(kù)、冰箱的溫度、濕度。
檢查各保藏試管有無(wú)雜菌污染現(xiàn)象,如發(fā)現(xiàn)雜菌污染,則取出該管重新移植,培養(yǎng)后補(bǔ)缺。
4.6移植復(fù)核
大量植原體-植物共生體進(jìn)行移植時(shí),各菌株的編號(hào)、所用培養(yǎng)基需仔細(xì)核對(duì)無(wú)誤。每次移植培養(yǎng)后,對(duì)照原保藏的菌株和菌種順序號(hào)卡片名錄,核實(shí)無(wú)誤再行存放。
4.7     保藏指標(biāo)
當(dāng)獲得的組培苗表現(xiàn)典型癥狀或在熒光顯微鏡下觀察到特異植原體 DNA 熒光后即可進(jìn)行菌株的保藏。
5     操作方法與步驟
5.1   帶菌外植體采集
在田間采集表現(xiàn)典型癥狀的新鮮枝條,剪去葉和嫩稍,經(jīng)酒精和升汞等消毒劑表面消毒后,截成具節(jié)莖段,移入培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
5.2   無(wú)雜菌組培苗的獲得
外植體長(zhǎng)出新枝后,選無(wú)雜菌感染的外植體,截取新枝,移入新配制的培養(yǎng)基上培養(yǎng)和繁殖。如培養(yǎng)基被雜菌污染,將組培苗再進(jìn)行表面消毒處理,移入新的培養(yǎng)基上培養(yǎng),重復(fù)操作2-3次,直至獲得無(wú)雜菌組培苗為止。
5.3    組織帶菌鑒定
用DAPI熒光顯微鏡技術(shù)和PCR技術(shù)鑒定組織帶菌狀況和濃度。
DAPI熒光顯微鏡技術(shù)步驟:取植物幼莖、葉柄或根等,進(jìn)行組織切片,厚度在100mm左右,用5%戊二醛固定2小時(shí)左右,用0.1M磷酸緩沖液(pH7.0)洗滌后,用1mg  /ml  4'6-二瞇基-2-苯基吲哚(DAPI)染色,zui后置于落射熒光顯微鏡下檢查韌皮部特異性植原體DNA熒光,激發(fā)濾光片波長(zhǎng)為365nm,阻斷濾光片波長(zhǎng)為420nm。
PCR技術(shù)步驟:從組織中提取植物和植原體總DNA,用植原體16S  rRNA等基因序列的引物進(jìn)行PCR基因擴(kuò)增,然后進(jìn)行瓊脂糖電泳,檢測(cè)特異性擴(kuò)增產(chǎn)物譜帶。
5.4  常溫保藏
植原體-植物共生體在適宜的組織培養(yǎng)基上培養(yǎng),并正常溫度和光照下(20-28 C,光照強(qiáng)度在1000-3000  lx)進(jìn)行保藏,保藏周期為1-3個(gè)月。
5.5   低溫保藏
將正常溫度和光照下(20-28 C,光照強(qiáng)度在1000-3000  lx)培養(yǎng)的植原體-植物共生體移入含組織培養(yǎng)基的試管內(nèi),移入6-10 C低溫冷藏柜內(nèi)保藏,1-2個(gè)月將試管暴露于正常培養(yǎng)溫度和光照條件下補(bǔ)光2-3天,然后存放于低溫冷藏柜繼續(xù)保藏,保藏周期為6個(gè)月至1年以上。
全年征稿/資訊合作 聯(lián)系郵箱:hbzhan@vip.qq.com
版權(quán)與免責(zé)聲明
1、凡本網(wǎng)注明"來(lái)源:環(huán)保在線"的所有作品,版權(quán)均屬于環(huán)保在線,轉(zhuǎn)載請(qǐng)必須注明環(huán)保在線,http://www.niunang.cn。違反者本網(wǎng)將追究相關(guān)法律責(zé)任。
2、企業(yè)發(fā)布的公司新聞、技術(shù)文章、資料下載等內(nèi)容,如涉及侵權(quán)、違規(guī)遭投訴的,一律由發(fā)布企業(yè)自行承擔(dān)責(zé)任,本網(wǎng)有權(quán)刪除內(nèi)容并追溯責(zé)任。
3、本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其它來(lái)源的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)或證實(shí)其內(nèi)容的真實(shí)性,不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品來(lái)源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
4、如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。

上海瑞齊生物科技有限公司作者

產(chǎn)品推薦更多>>
我要投稿
  • 投稿請(qǐng)發(fā)送郵件至:(郵件標(biāo)題請(qǐng)備注“投稿”)hbzhan@vip.qq.com
  • 聯(lián)系電話0571-87759680
環(huán)保行業(yè)“互聯(lián)網(wǎng)+”服務(wù)平臺(tái)
環(huán)保在線APP

功能豐富 實(shí)時(shí)交流

環(huán)保在線小程序

訂閱獲取更多服務(wù)

微信公眾號(hào)

關(guān)注我們

抖音

環(huán)保在線網(wǎng)

抖音號(hào):hbzhan

打開(kāi)抖音 搜索頁(yè)掃一掃

視頻號(hào)

環(huán)保在線

公眾號(hào):環(huán)保在線

打開(kāi)微信掃碼關(guān)注視頻號(hào)

快手

環(huán)保在線

快手ID:2537047074

打開(kāi)快手 掃一掃關(guān)注
意見(jiàn)反饋
亚洲美女喘息呻吟的网站-国产免费一区二区三区三洲| 91精品国产影片一区二区三区-欧美精品久久久精品一区二区| 久久亚州天堂一区二区-色噜噜色哟哟一区二区三区| 久久精品国产亚洲av湖南-竹菊精品一区二区三区| 亚洲女人黄色录像一区-日韩av电影在线免费看| 欧洲精品一区二区三区中文字幕-91久久国产综合久久蜜月精品| 人妻丝袜中文字幕在线视频-亚洲成av人片一区二区三区| 91亚洲美女视频在线-熟妇人妻精品一区二区三区蜜臀| 日韩亚洲一区二区三区av-欧美综合在线观看一区二区三区| 欧美亚洲另类久久久精品-国产精品一区二区亚洲推荐| 在线免费观看黄片喷水-国产精品白丝网站在线观看| 91精品国产无线乱码在线-999精品视频免费看| 国产在线一区二区三区欧美-久久偷拍精品视频久久| 亚洲精品蜜桃在线观看-国产欧美日韩在线观看精品观看| 久久久噜噜噜久久狠狠50岁-精品一区二区三区av| 熟女少妇免费一区二区-麻豆一区二区三区免费在线观看| 国产精品美女在线网址-久草免费福利在线观看视频| 成人免费资源在线观看-欧美国产日韩高清在线综合| 看肥婆女人黄色儿逼视频-秋霞电影一区二区三区四区| 国产成人精品免费视频大全办公室-亚洲欧美日本综合在线| 欧美日本亚一级二级三区久久精品-日韩欧美一区二区久久婷婷| 国产午夜精品理论片A级漫画-久久精品国产99亚洲精品| 亚洲欧美日韩二区三区-国产在线欧美一区日韩二区| av中文字幕男人天堂-懂色av一区二区三区在线观看| 哦啊好大用力欧美视频-麻豆国产传媒片在线观看| 亚洲综合av一区二区三区-高潮又爽又黄无遮挡激情视频| 中文字幕人妻少妇第一页-隔壁的女孩在线看中文字幕| 人妻少妇无乱码中文字幕-人成免费视频一区二区| 亚洲另类熟女国产精品-懂色一区二区三区在线播放| 国产欧美一区二区三区嗯嗯-欧美一区二区日本国产激情| 久色高清精品在线国产-国产精品视频一区三区四区| av中文字幕男人天堂-懂色av一区二区三区在线观看| 婷婷综合在线视频观看-亚洲一区二区三区香蕉| 婷婷六月视频在线观看-久久亚洲综合国产精品| 国产人妻人伦精品日本-国产98超碰人人做人人爱| 亚洲欧美激情自拍色图-国产亚洲精品sese在线播放| 欧美日韩亚洲1区2区-黄污视频在线观看不卡| 男人的天堂久久精品激情-最新亚洲精品a国产播放| 交换朋友的妻子中文字幕-日本美女8x8x8x8| 色综合色综合久久综合频道-埃及艳后黄版在线观看| 亚洲国产中文欧美一区二区三区-国产精品一区二区视频成人|