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細(xì)胞培養(yǎng)的操作步驟

2010年10月20日 19:52:49人氣:1247來源:上海瑞齊生物科技有限公司

一、原代培養(yǎng)及其操作步驟

原代分離細(xì)胞培養(yǎng)是指從供體內(nèi)取出組織后,經(jīng)機(jī)械以及消化分離成單個細(xì)胞或單一型細(xì)胞群,使之在體外模擬人體生理環(huán)境,在無菌、適當(dāng)溫度和一定的營養(yǎng)條件下,生存、生長和繁殖。原代培養(yǎng)細(xì)胞常有不同的細(xì)胞成分,生長緩慢,但是更能代表所來源的組織細(xì)胞類型和表達(dá)組織的特異性特征。利用原代細(xì)胞培養(yǎng)做各種實驗,如藥物測試、細(xì)胞分化及病毒學(xué)方面的試驗效果很好。其操作步驟如下。
1. 剪切組織 先將所取得的組織,用D-Hanks或Hanks液清洗,以去除表面血污,并用*去除黏附的結(jié)締組織等非培養(yǎng)所需組織。再次清洗后,用*將組織切成若干小塊,移入*小瓶或小燒杯中,加入適量緩沖液,用彎頭眼科剪,反復(fù)剪切組織,直到組織成糊狀,約1mm3大小。靜置片刻后,用吸管吸去上層液體,加入適當(dāng)?shù)木彌_液再清洗一次。
2. 消化分離 消化分離的目的是將細(xì)小的組織塊消化分離成細(xì)胞團(tuán)或分散的單個細(xì)胞,以利于進(jìn)一步的培養(yǎng),常用的消化酶有*和膠原酶。
3. 培養(yǎng) 細(xì)胞懸液用計數(shù)板進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。用培養(yǎng)液將細(xì)胞數(shù)調(diào)整為(2~5)×105 cells/ml,或?qū)嶒炈杳芏龋盅b于培養(yǎng)瓶中,使細(xì)胞懸液的量以覆蓋后略高于培養(yǎng)瓶底部為宜。置CO2培養(yǎng)箱內(nèi),5%CO2,37℃靜置培養(yǎng)。一般3~5d,原代培養(yǎng)細(xì)胞可以黏附于瓶壁,并伸展開始生長,可補(bǔ)加原培養(yǎng)液量1/2的新培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)2~3d后換液,一般7~14d可以長滿瓶壁,進(jìn)行傳代。

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