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上海瑞齊生物科技有限公司作者
原代細(xì)胞培養(yǎng)成功以后，需要進(jìn)行分離培養(yǎng)，否則細(xì)胞會因生存空間不足或密度過大，營養(yǎng)障礙，影響細(xì)胞生長。細(xì)胞由原培養(yǎng)瓶內(nèi)分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的過程稱之為傳代培養(yǎng)。傳代細(xì)胞允許培養(yǎng)的細(xì)胞擴(kuò)增（形成細(xì)胞株），可以進(jìn)行細(xì)胞克隆，易于保存，但可能喪失一些特殊的細(xì)胞和分化特征。傳代細(xì)胞形成細(xì)胞株的zui大利處在于提供了大量持久的實(shí)驗(yàn)材料，便于實(shí)驗(yàn)。1. 操作步驟
（1）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。
（2）向瓶內(nèi)加入*液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜。
（3）置37℃孵箱或室溫（25℃溫度）下進(jìn)行消化，2~5min后把培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮、細(xì)胞間隙增大后，應(yīng)立即中止消化。
（4）吸出消化液，向瓶內(nèi)加入Hanks液少量，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶，把殘留消化液沖掉，然后再加培養(yǎng)液。如果僅使用*消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培養(yǎng)液，終止消化。
（5）使用彎頭吸管，吸取瓶內(nèi)培養(yǎng)液，按順序反復(fù)輕輕吹打瓶壁細(xì)胞，使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液。吹打時(shí)動(dòng)作要輕柔，以防用力過猛損傷細(xì)胞。（6）用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后，分別接種于新的培養(yǎng)瓶中，置
CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
（7）細(xì)胞培養(yǎng)換液時(shí)間應(yīng)根據(jù)細(xì)胞生長的狀態(tài)和實(shí)驗(yàn)要求來確定。一般2～3d后應(yīng)換一次生長液。待細(xì)胞鋪滿器皿底面，即可使用；也可繼續(xù)傳代擴(kuò)大培養(yǎng)或換成維持液。
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