液相色譜法,采用顆粒十分細(xì)的固定相,并采用高壓泵輸送流動(dòng)相,全部工作通過儀器來完成,這種新的儀器分析方法稱為液相色譜法。目前,HPLC在有機(jī)化學(xué)、生化、醫(yī)學(xué)、藥物臨床、化工、食品衛(wèi)生、環(huán)保監(jiān)測、商檢和法檢等方面都有廣泛的用途,而在生物和高分子試樣的分離和分析中更是風(fēng)sao。在短短的三十多年里,HPLC從初創(chuàng)一下發(fā)展成為成熟而廣泛應(yīng)用的分析方法,的確是化學(xué)*一件引人注目的事情。本文主要從液相色譜的應(yīng)用范圍和操作步驟以及主要事項(xiàng)來更的解讀液相色譜儀！

一、液相色譜的應(yīng)用范圍

1.分離混合物

液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動(dòng)相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。

通過與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合，液相色譜法所達(dá)到的高分辨率和高靈敏度，可分離并同時(shí)測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)，能夠分離復(fù)雜混合物中的微量成分。并且隨著固定相的發(fā)展，還可在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成對其的分離。

2.生化分析

由于液相色譜法具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用，流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn)，因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機(jī)分析等各種領(lǐng)域，并已成為解決生化分析問題zui有前途的方法。

3.儀器聯(lián)用

液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個(gè)重要的發(fā)展方向。液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)受到普遍重視，如分析氨基甲酸酯農(nóng)yao和多核芳烴等：液相色譜一紅外光譜聯(lián)用也發(fā)展很快，如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類等．使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展

二、液相色譜的操作過程

1.過濾流動(dòng)相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜。  

2.對抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。

3.打開HPLC工作站（包括計(jì)算機(jī)軟件和色譜儀），連接好流動(dòng)相管道，連接檢測系統(tǒng)。   

4.進(jìn)入HPLC控制界面主菜單，點(diǎn)擊manual，進(jìn)入手動(dòng)菜單。    

5.有一段時(shí)間沒用，或者換了新的流動(dòng)相，需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進(jìn)樣閥，需要在manual菜單下，先點(diǎn)擊purge，再點(diǎn)擊start，沖洗時(shí)速度不要超過10?ml/min。    

6.調(diào)節(jié)流量，初次使用新的流動(dòng)相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。點(diǎn)擊injure，選用合適的流速，點(diǎn)擊on，走基線，觀察基線的情況。   

7.設(shè)計(jì)走樣方法。點(diǎn)擊file，選取select?users?and?methods，可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立一個(gè)新的方法，點(diǎn)擊new?method。選取需要的配件，包括進(jìn)樣閥，泵，檢測器等，根據(jù)需要而不同。選完后，點(diǎn)擊protocol。一個(gè)完整的走樣方法需要包括：a.進(jìn)樣前的穩(wěn)流，一般2-5分鐘；b.基線歸零；c.進(jìn)樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換；d.走樣時(shí)間，隨不同的樣品而不同。  

8.進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。選定走樣方法，點(diǎn)擊start。進(jìn)樣，所有的樣品均需過濾。方法走完后，點(diǎn)擊postrun，可記錄數(shù)據(jù)和做標(biāo)記等。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩余物。   

9.填寫登記本，由負(fù)責(zé)人簽字。

三、液相色譜操作過程中注意事項(xiàng)：   

1. 流動(dòng)相均需色譜純度，水用20m的去離子水。脫氣后的流動(dòng)相要小心振動(dòng)盡量不引起氣泡。  

2. 柱子是非常脆弱的，*次做的方法，先不要讓液體過柱子。

3. 所有過柱子的液體均需嚴(yán)格的過濾。

4. 壓力不能太大，不要超過2000 psi。

5. 因?yàn)榫彌_試劑遇有機(jī)溶劑，會結(jié)晶，有損色譜柱，所以，每次由有機(jī)相變流動(dòng)相或流動(dòng)相變有機(jī)相均需用蒸餾水清洗。